张秀梅 周永华 丛林 刘曙 石明 苏建军

    乳腺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，发病率与死亡率逐年上升，非编码RNA在基因转录表达过程中发挥重要调控作用，有研究表明微小RNA(microRNA，miRNA)可通过靶mRNA结合而调控基因表达从而抑制其翻译过程，并可调控细胞增殖、迁移及侵袭等过程[1,2]。长链非编码RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)在乳腺癌等肿瘤中异常表达，并可调控肿瘤细胞增殖及迁移[3,4]。因而探讨LncRNA/miRNA在乳腺癌发生及转移过程中的调控机制有助于提高乳腺癌治疗效果及改善患者预后。长链非编码RNA MAPKAPK5-AS1(Long non-coding RNA MAPKAPK5-AS1，LncRNA MAPKAPK5-AS1)在肺癌细胞中表达量升高，并可增强肺癌细胞侵袭能力及抑制细胞凋亡[5]。但MAPKAPK5-AS1在乳腺癌细胞发生及转移过程中的作用机制尚未完全阐明。通过生物信息学分析显示微小RNA-96(microRNA-96，miR-96)可能是MAPKAPK5-AS1的靶基因，研究表明miR-96在乳腺癌、胃癌等肿瘤中异常表达，并可调控细胞增殖、迁移及侵袭等过程[6,7]。但MAPKAPK5-AS1是否可通过调控miR-96的表达从而参与乳腺癌细胞发生及转移过程尚未可知。因此，本研究探讨MAPKAPK5-AS1、miR-96在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖及迁移的影响，探究MAPKAPK5-AS1对miR-96的靶向调控作用，为乳腺癌早期诊断及治疗提供潜在靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 乳腺癌组织及癌旁组织：选取2017年2月至2018年10月我院收治的乳腺癌患者41例为研究对象，患者均经病理证实为乳腺癌，平均年龄(56.35±8.57)岁，患者均接受手术治疗，于术中切除乳腺癌组织及癌旁组织，放入液氮中保存，术后转移至-80℃超低温冰箱保存。本研究经医院伦理委员会批准，患者知情且签署同意书。

    1.1.2 试剂：乳腺癌细胞MDA-MB-468购自美国ATCC细胞库；杜氏改良培养基(DMEM)、胎牛血清、胰蛋白酶、Opti-MEM减血清培养基购自美国Gibco公司；Lipofectamine2000与Trizol购自美国Invitrogen公司；反转录与实时荧光定量PCR试剂盒购自美国Thermo Fisher公司；MAPKAPK5-AS1小分子干扰RNA(si-MAPKAPK5-AS1)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、miR-96寡核苷酸模拟物(miR-96 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、miR-96特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-96)及阴性对照(anti-miR-NC)购自上海吉玛制药技术有限公司；Transwell小室购自美国Corning公司；RIPA裂解液、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid ......