宋银雪 高烨 许静 杜俊凯

    创伤、感染、休克等均可并发脓毒症，而该病属于一种全身炎性反应综合征，可损伤肺、心、肾等重要脏器，甚至可诱发多脏器功能衰竭综合征，进而致死。有报道显示，全球每年约有1 900万人口新发脓毒症，其中脓毒症并发急性肾损伤者占比为30.5%～65.0%，且在脓毒症并发急性肾损伤者中死亡率为50%～70%[1,2]。但是目前临床上对脓毒症并发急性肾损伤患者仍缺乏高效的治疗方案，虽然乌司他丁等有一定的肾脏保护作用[3]，但综合效果不甚理想。番石榴叶总三萜是番石榴叶中提取的有效成分，其中含有丰富的乌苏酸、积雪草酸等，在既往的研究中证实该药物具有肾脏保护作用[4]，但是在脓毒症并急性肾损伤中的有效性尚未可知。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路是常用的炎性反应通路，该通路激活可影响其下游核因子-2-相关因子-2(Nrf2)基因与蛋白的表达，使得促炎性因子水平释放量显著增加，从而诱发急性肾损伤[5,6]。故此，本研究特设计大鼠试验探讨番石榴叶总三萜对脓毒症大鼠急性肾损伤的治疗作用，并从基因和蛋白水平上探讨该药物可能的调控机制，报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 60只成年SD大鼠，无特定病原体级，雌雄各半，均属同系，7～9周龄，体重180～220 g，购自广西医科大学实验动物中心，合格证号：SCXK(桂)2018-0001。将所有SD大鼠分笼喂养，适应性喂养1周，喂养条件：自由饮食和进水，温度(25±2)℃，湿度30%～50%，光照12 h、黑暗12 h，光照和黑暗交替进行。

    1.2 试剂与仪器 乌司他丁(购自美国Roche公司)；番石榴叶总三萜(购自温州东匝津玛生物科技有限公司，纯度≥98%)；水合氯醛溶液(购自上海经科化学科技有限公司)；鼠血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)酶联免疫法(ELISA)检测试剂盒(购自上海江莱生物科技有限公司)；鼠白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)ELISA检测试剂盒(购自上海江莱生物科技有限公司)；苏木素-伊红(HE)染色试剂盒(购自大连宝生物科技有限公司)；Trizol试剂盒(购自大连宝生物科技有限公司)；目的基因和内参上下游引物委托大连宝生物科技有限公司合成；蛋白定量试剂盒(购自美国ABI公司)；兔抗鼠PI3K、AKT、Nrf2、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)单克隆抗体、山羊抗兔PI3K、AKT、Nrf2、p-PI3K、p-AKT多克隆抗体(均购自美国Bio-Rad公司) ......