马莉莎 王嵘 柴丽霞

    肺癌(lung cancer)是世界上发病率最高的癌症，患者5年生存率1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 人正常肺上皮细胞BEAS-2B及人肺癌细胞A549、SPCA1和HCI-H596细胞购自中科院上海细胞库；胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和DMEM高糖培养基购自美国Gibco公司，牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)、胰蛋白酶Trypsin购自Sigma-Aldrich公司；双荧光素酶报告系统(Dual-Luciferase Reporter Assay System)购自美国Promega公司；引物、miR-126-5p mimics(miR-126-5p)、miR-126-5p抑制剂(anti-miR-126-5p)、VIM-AS1干扰物(si-VIM-AS1)、空载体和对照物(miR-con、anti-NC和si-NC)及VIM-AS1突变型和野生型双荧光素酶载体购自上海吉玛制药技术有限公司；Lipofectamine 2000转染试剂、Total RNA提取试剂盒、real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒(RT-PCR)购自宝生物工程(大连)有限公司；Real-time PCR仪购自美国Bio-Rad公司；BCA蛋白试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:将人正常肺上皮细胞BEAS-2B及人肺癌细胞A549、SPCA1和HCI-H596培养在含10% FBS的DMEM高糖培养液(添加100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素)中，37℃ 5% CO2培养箱中培养，湿度95%，将细胞培养至对数生长期，消化传代。

    1.2.2 细胞转染:收集对数生长期的A549细胞，用培养液将细胞稀释至1×106个/ml，以200 μl细胞/孔的密度接种于6孔板中 ......