姜永宁

    帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的神经退行性疾病，主要发生于>60岁人群。PD的主要病理改变为中脑黑质致密部多巴胺能神经元丢失和残存神经元胞内α-突触核蛋白聚集沉积。研究认为，PD黑质多巴胺能神经元变性中存在细胞凋亡现象，凋亡是PD多巴胺能神经元死亡的主要机制[1]，降低神经细胞凋亡对于PD疾病的治疗具有积极意义。1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)是一种常用的多巴胺神经元毒素，其诱导多巴胺能神经元凋亡已广泛用于PD的体外细胞模型研究[2]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度为18～25个核苷酸的小分子非编码RNA，可与靶基因mRNA的3’非翻译区(3’untranslated region，3’UTR)靶向结合，抑制靶mRNA翻译或降解靶mRNA，从而在转录后水平调控基因的表达，参与PD的发生发展过程[3,4]。研究显示，经左旋多巴治疗后的PD患者血清中miR-30a-5p的表达水平显著上调，miR-30a-5p可能是PD的潜在生物标记物[5]。但miR-30a-5p与PD的具体关系及调控机制还未被阐明。Starbase生物信息学软件预测显示，泛素特异性蛋白酶22(ubiquitin specific protease 22，USP22)的3’UTR与miR-30a-5p的核苷酸序列存在连续的结合位点，提示USP22可能是miR-30a-5p的靶基因。USP22属于DUBs家族，参与组蛋白去泛素化、乙酰化进而参与hSAGA复合物所调节的基因转录与表达等。目前认为USP22是肿瘤标志物，与肿瘤复发、转移及预后密切相关[6]，其在PD中的作用笔者还未见相关报道。本研究旨在探讨miR-30a-5p对MPP+诱导的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞增殖和凋亡的影响及其能否通过调控USP22影响MPP+诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡，以期为PD的靶向分子治疗提供新途径。报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞购自中国科学院上海细胞库，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自美国Hycolne公司，DMEM培养基购自北京索莱宝科技有限公司，细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8，CCK-8)、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)蛋白检测试剂盒、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(propidium iodide，PI)细胞凋亡试剂盒和双荧光素酶活性检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司 ......