王海 徐幸幸 马海 彭勇

    胰腺癌是人类最恶性的实体瘤之一，其特征在于诊断晚，进展快，早期转移和化学耐药性。尽管近年来使用了越来越多的疗法，包括手术切除，化学疗法和放射疗法，但患者总体5年生存率仍1 材料与方法

    1.1 材料 灵芝乙醇提取物(黄色粉末，含量为63.77 g/g生药，成都荣保生物科技开发有限公司)，胰腺癌细胞SW1990(美国典藏培养物保存中心)，Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640培养基(美国Thermo Fisher Scientific公司)，Lipofectamine 2000试剂(美国Invitrogen公司)，Syk过表达质粒pcDNA3.1-Syk、过表达空载质粒pcDNA3.1(上海GenePharma公司)，细胞核相关抗原Ki67(Nuclear associated antigen Ki67，Ki67)小鼠单克隆抗体、上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)小鼠单克隆抗体、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)小鼠单克隆抗体及Syk小鼠单克隆抗体、HRP标记的山羊抗鼠IgG二抗(英国Abcam公司)。

    1.2 细胞培养 细胞SW1990在RPMI 1640培养基中(10%胎牛血清、100 mg/ml链霉素和100 U/ml青霉素)培养，并在37℃、5% CO2的培养箱内生长。

    1.3 细胞分组与处理 将对数生长期的细胞SW1990分为以下几组：对照组(未给予药物)，低剂量药物组(给予25 μg/ml灵芝乙醇提取物)，中剂量药物组(给予50 μg/ml灵芝乙醇提取物)，高剂量药物组(给予100 μg/ml灵芝乙醇提取物)，pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)，pcDNA3.1-Syk组(转染pcDNA3.1-Syk)，高剂量药物组+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1并给予100 μg/ml灵芝乙醇提取物)，高剂量药物组+pcDNA3.1-Syk组(转染pcDNA3.1-Syk并给予100 μg/ml灵芝乙醇提取物)。其中，灵芝乙醇提取物作用时间为48 h。在进行细胞转染时，根据制造商的说明 ......