刘红敏

    乙型肝炎病毒简称乙肝病毒(HBV)，是目前已知的感染人的最小DNA病毒之一，直径只有头发丝的1/40 000，而它也是最难治愈的病毒之一[1,2]。HHBV虽然是一个双链DNA病毒，但和身为RNA的艾滋病毒(HIV)一样，其复制存在着逆转录的过程，使得病毒基因组可以被整合到机体中，使得机体难以将病毒彻底清除，成为潜在致癌的隐患；另外HBV在进入肝细胞后可以转化成cccDNA，并长期潜伏在细胞核中，具有很强的隐蔽性，即使抗病毒治疗也难以彻底清除；而一旦患者长期使用免疫抑制剂或化疗、放疗导致机免疫力低下，cccDNA则会跳出转入活跃的复制状态，使得HBV感染长期持续性存在。因此，HBV在目前医疗水平上，是一个可以控制但不能彻底清除的病毒[3]。HBV-DNA的检测和监测在预防和乙型肝炎患者的治疗过程中非常重要。参照美国临床实验室标准化委员会颁布的EP系列文[4,5]件及《医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明》[6]和《核酸检测试剂盒质量评价技术规范》[7]，从精密度、正确度、检测限(定量检测下限)、线性范围分析性能标准操作来评价和评估我们实验室检测乙型肝炎病毒的检测系统[8]。

    1 材料与方法

    1.1 实验仪器与检测试剂 扩增仪为美国ABI StepOnePlus；加样器为赛默飞医疗器械有限公司提供；高速冷冻离心机来自湖南湘仪实验室仪器开发公司；检测试剂盒为艾康生物有限公司提供。

    1.2 实验样本选择 精密度实验所用定值阳性样本为故城县医院核酸实验室收集的高浓度的阳性标本的混合物，正确度所用参考物质为2020年卫生部临检中心核酸病毒学室间质评标本。稀释用血清为阴性血清(HBV-DNA,HIV,HCV,TP等感染性疾病筛查均为阴性)，且该阴性血清无脂血溶血等异常情况。

    1.3 检测原理 试剂盒选用乙型肝炎病毒保守基因片段设计特异引物及特异Taqman探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，PCR延伸反应中，Taq酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来 ......