闫红江 高伟年 高少林 朱海勇 石彦涛 张合林

    全球范围内，肺癌是所有癌症中发病率和死亡率排名第一位的癌种[1]，肺癌也是我国最常见的肿瘤[2]。近年来，通过大规模的基因组研究，对肺癌尤其是肺腺癌的分子机制的认识有了显著的进展[3]；并且已经找到一些重要的治疗靶点，如，EGFR和ALK，开发出的靶向药物的临床应用显著改善了肺癌患者的生存率和预后[4,5]。但是，靶向药的应用也面临着挑战：临床使用含靶向药的治疗方案后，患者经常出现不良反应、耐药性或是其他的并发症[6-8]。在肺癌的不同阶段，基因会发生上调或下调的不同改变，了解肺癌发生和进展的分子机制对于肺癌的诊治具有重要的意义，有助于寻找开发新的诊断和治疗的靶点，提高治疗效果，改善患者的预后。K2P K+通道是一类结构独特的离子通道家族，参与多种生理功能的调节，如细胞体积、细胞凋亡、血管舒张、神经元兴奋和疼痛感知；该类家族成员是多种心血管和神经疾病的治疗靶点及挥发性麻醉药的主要作用靶点[9-11]。钾双孔域通道亚家族K成员1(KCNK1)(K2P1/TWIK-1)是该家族第一个被鉴定的成员，在心脏和大脑的重要生理过程中发挥作用[12-15]。目前KCNK1在肿瘤中的功能和机制还不清楚。本研究探讨KCNK1在肺癌中的功能及其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 H1975和H1299细胞购自中科院上海细胞库；细胞培养基Roswell Park Memorial Institute-1640(RPMI-1640)和2.5%胰酶购自hyclone；胎牛血清购自Gibco；细胞培养用1%青霉素-链霉素抗体购自Gibco；Trizol购自英韦创津；细胞凋亡试剂盒购自Sigma-aldrich，RNA反转录试剂盒和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR)试剂盒购自Takara；蛋白质裂解液购自北京碧云天生物科技有限公司。细胞增殖与毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit，CCK-8)购自翌圣生物科技(上海)有限公司；Transwell小室试剂盒购自康宁公司；重组Anti-CREB3抗体(ab180119)和Anti-GAPDH抗体(ab8245)均购自艾博抗生物科技有限公司。辣根过氧化物过氧化酶(horseradish peroxidase，HRP)标记的二抗购自中杉金桥生物科技有限公司。

    1.2 实验方法 ......