黄润英 范智利 肖吉群 郑巍 蔡强

    支气管肺发育不良(bronchopulm onary dysplasi，BPD)是早产儿常见并发症之一，发病机制复杂，其中高氧致肺损伤是主要原因，患儿肺发育不全且长时间处于高氧环境中易出现损伤[1]。而目前大多数学者认为氧化应激是肺损伤的主要原因，而细胞凋亡成为氧化应激引起肺损伤的主要机制之一[2]。微小RNA(microRNA，miRNA)在疾病发生发展中参与氧化应激、炎性反应等过程，其中mir-375与氧化应激关系密切，其水平变化与疾病关系密切[3]；在肿瘤疾病中mir-375是凋亡肿瘤细胞衍生出的miRNA，高表达的mir-375可在凋亡过程中以非外泌体形式释放出来，亦是吞噬细胞浸润以及促进肿瘤微环境发展的关键调节剂[4]，但在BPD中笔者尚未发现研究。notch通路可决定肺泡上皮细胞的分化方向，参与高氧肺损伤修复过程，是一种保护性应激反应[5]。且mir-375与notch1在细胞增殖、迁移、侵袭、分化中都关系密切[6]，但未发现二者在细胞凋亡中的相关研究。本研究构建BPD模型，观察mir-375对BPD大鼠肺上皮细胞凋亡的影响并探讨其机制，为靶位点治疗提供一定的参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物:健康SD孕鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SYXK(京)-2017-0033，清洁级，足月顺产同一批新生SD大鼠作为研究对象，雄雌不限。所有实验经医院动物实验伦理委员会批准。

    1.1.2 试剂与仪器:mir-375拮抗剂阴性对照、mir-375拮抗剂均购自广州锐博生物科技有限公司。mir-375、U6引物由上海生工生物工程股份有限公司合成；苏木素-伊红(hematoxylin-easine,HE)染色试剂盒、一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒均购自碧云天生物科技有限公司，货号：C0105、C1088、S0131S、S0060；一抗兔抗notch1、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bcl2 associated X protein，Bax)、GAPDH均购自英国abcam公司，货号：ab52627、ab216985、ab59348、ab181602 ......