刘军刚 刘洋 哈庆

    口腔癌是发生在头颈部的常见的恶性肿瘤之一，其中鳞状细胞癌为最常见的发病类型，约占90%左右，一般预后较差[1]。众多基因在转录、翻译等过程中发生改变，都可成为口腔癌发病的诱因[2]，miR-543在口腔鳞癌细胞中呈明显的高表达，当miR-543过表达后，可明显促进肿瘤细胞的增殖、侵袭与迁移，同时抑制细胞的凋亡[3]；使用miRCURY LNATM microRNA 数据库对人口腔鳞癌细胞(oral squamous cell carcinomas,OSCC)细胞系中的癌基因miRNAs进行功能性筛选，鉴定出miR-361-3p对OSCC的生长抑制程度最大，靶向敲除miR-361-3p可能是一种有效的治疗OSCC的方法[4]。自噬是一种机体的自我保护机制，是将自身代谢的细胞质蛋白或细胞器一并吞噬，进入囊泡，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其包裹的内容物的过程，使机体细胞得到稳定的代谢与更新。当机体受到某些炎症、辐射或有害物质等侵害时，miRNAs的表达发生改变的同时，机体稳定的自噬通路也受到破坏，部分自噬相关蛋白发生改变，影响病情的发生发展。有文献发现miR-181c-5p在口腔癌细胞的表达明显降低[5]，且在miRWalK 2.0数据库中检索到自噬基因Beclin1[6]为miR-181c-5p的潜在靶基因，Beclin1过表达在OSCC的侵袭、转移及预后过程中起重要作用[7]。本实验探究miR-181c-5p对口腔鳞癌的增殖和凋亡的影响以及可能的作用机制，为口腔鳞癌的早期诊断与基因治疗开辟新的途径。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 胎牛血清购自四季清生物技术公司；RPM1640培养基购自Gibco公司；CCK8购自美国Solarbio公司；质粒提取试剂盒购自天根生物技术有限公司；TransLipid HL Transfection Reagent转染试剂购自北京全世金生物技术公司；双荧光素酶检测试剂盒购自Promega公司；反转录试剂盒购自Thermo公司；Beclin1、Bcl-2蛋白印记抗体购自Abgent公司；Annexin V-PE/7-AAD凋亡试剂盒购自上海碧云天公司，hsa-miR-181c-5p、Beclin1-3’UTR引物序列购自华大基因有限公司；miR-181c-5p模拟物(mimic)/抑制物(inhibitor)序列引物购自上海吉玛公司 ......