唐国伟 李华山 郭明浩 乌达美

    结直肠癌是一种侵袭性的原发性肠道恶性肿瘤，其发病率、死亡率在全球各类癌症中分别高居第三和第二位[1]。尽管早期筛查和根治性手术显著提高了5年生存率，但大多数结直肠癌患者仍被诊断为晚期[2]。由于缺乏有效的治疗手段，晚期患者死亡率较高。因此，寻找新的、有效的治疗策略显得至关重要。环状RNA(circRNA)是一类由外显子序列反向剪切产生的具有共价闭合环状结构的内源性RNA，其通过与微小RNA(miRNA)反应元件结合负调控miRNA活性在肿瘤发生、进展中起关键作用[3,4]。研究显示，circRNA中心体/纺锤体相关蛋白基因(circCSPP1)可促进人B细胞淋巴瘤和乳腺癌的进展[5,6]。在卵巢癌中，抑制circCSPP1表达可降低卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力[7]。miRNA在肿瘤生物学进程中亦具有重要作用。研究显示，miR-495-3p在结肠癌细胞中表达下调，过表达miR-495-3p抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡，发挥抑癌作用[8]。序列分析发现circCSPP1与miR-495-3p存在特异性结合位点。然而，circCSPP1在结肠癌中的作用及其生物学机制尚不清楚。有氧糖酵解是癌细胞的典型特征，抑制糖酵解有助于控制癌细胞的生长。本研究通过观察在结肠癌组织中circCSPP1、miR-495-3p表达水平，重点探讨circCSPP1对结肠癌细胞增殖和糖酵解的影响及其与miR-495-3p之间关系，以期为结直肠癌治疗提供有效靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 组织来源:收集2017年1月至2018年6月我院收治的结直肠癌患者41例，手术切除的癌组织及癌旁组织标本。患者术前均未行抗肿瘤治疗。组织标本均在术后0.5 h内获取，液氮保存备用。本研究在开展前已获得我院伦理委员会批准，所有患者已签署知情同意书。

    1.1.2 细胞与试剂:人结直肠癌细胞HCT116购于中国典型培养物保藏中心；DMEM培养基、DMEM培养基购于美国Invitrogen公司；小干扰RNA(si-RNA)、miRNA模拟物(miRNA mimics)、miRNA抑制物(anti-miRNA)、双荧光素酶报告载体由广州复能基因公司提供；一步法RT-qPCR SuperMix试剂盒购于上海联迈生物工程有限公司；TRIzol试剂、miRNeasy Mini试剂盒、PrimeScript RT试剂盒购于北京天根生化科技公司；细胞计数试剂盒(CCK-8)上海弗元生物科技有限公司；乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒购于北京索莱宝生化科技公司；放射免疫测定(RIPA)裂解缓冲液、兔抗人细胞周期素D1(CyclinD1)抗体、兔抗人p21抗体、兔抗人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体、山羊抗兔IgG二抗购于上海碧云天生物技术研究所 ......