王慧 张佳文 王健美 张薇

    长期以来，以顺铂为基础的治疗一直是临床肺癌化疗的重要方案，然而由于顺铂内在或获得性耐药的限制，多数肺癌患者的化疗以失败告终[1]。因此，阐明肺癌顺铂耐药的分子机制、探索有效的逆转顺铂耐药的方法，对改善肺癌患者的预后意义重大。长链非编码RNA(lncRNA)被定义为长度>200个核苷酸的真核生物转录本，其通过染色质修饰、转录和转录后机制充当基因表达的关键调节剂，广泛参与癌细胞的增殖、侵袭、转移和耐药生理病理过程[2,3]。LncRNA驱动蛋白家族成员9反义RNA1(KIF9-AS1)位于染色体3p21.31位点，研究显示KIF9-AS1可增强细胞活力，抑制细胞凋亡，在肾细胞癌对索拉非尼的耐药性中发挥了积极作用[4]。然而，KIF9-AS1在肺癌顺铂耐药中的作用和潜在机制知之甚少。本研究通过检测肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)中KIF9-AS1表达水平，探讨下调KIF9-AS1表达对A549/DDP细胞增殖、凋亡和顺铂耐药的影响，分析其下游潜在靶基因，以期为克服临床肺癌顺铂耐药提供有效靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人肺癌细胞A549、A549顺铂耐药细胞株(A549/DDP)购自上海北诺生物科技公司；RPMI-1640培养基、胎牛血清、青链霉素双抗购自武汉纯度生物科技有限公司；逆转录试剂盒、SYBR Green PCR Master Mix购自大连TAKARA生物科技公司；Lipofectamine 2000、TRIzol试剂购于上海科敏生物；miR-152-3p模拟物(miR-152-3p mimics)及其阴性对照、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC)、KIF9-AS1小干扰RNA(si-KIF9-AS1)、无序阴性对照(si-NC)、KIF9-AS1过表达质粒(pcDNA-KIF9-AS1)及其阴性对照(pcDNA-NC)、双荧光素酶报告基因载体由上海吉凯基因提供；细胞计数试剂盒(CCK-8)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin-V-FITC/PI)试剂盒购于上海贝博生物公司；多药耐药相关蛋白1(MRP1)、细胞周期素D1(CyclinD1)和裂解的半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)兔源单克隆抗体购自上海艾博抗生物技术公司；

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:A549/DDP、A549细胞均采用RPMI-1640培养基(补充10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 mg/L链霉素)进行常规培养 ......