缪文青 张阳 严海冬

    临床医学将发生于机体乳腺上皮组织的恶性肿瘤称为乳腺癌，是一种临床较为常用的恶性肿瘤[1]。乳腺癌患者主要临床表现为乳腺肿块、乳头溢液等，严重威胁患者身体健康[2,3]。乳腺癌症状发病具有较为明显的性别差异，据世界卫生组织调查数据显示，99%左右的乳腺癌患者为女性[4,5]。在欧美地区，乳腺癌发病率高达15%左右，相比之下，我国乳腺癌发病率较低，但是近年来一直呈现上升趋势，作为一项公共卫生问题引起广大专家的关注，许多学者致力于乳腺癌临床治疗的研究[6,7]。本文研究中设计实验，对乳腺癌MCF-7细胞中GIT1蛋白表达进行靶向调控，旨在探究下调GIT1对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡能力及周期分布的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 研究细胞：乳腺癌MCF-7细胞(中国医学科学院)。兔抗小鼠Bcl-2、Bax抗体(Sigma公司)；大鼠抗小鼠caspase3抗体(Gibco 公司)；小鼠抗大鼠MMP-9抗体(Hyclone公司)；兔抗大鼠ICAM-1抗体(BD公司)。本实验获我院伦理委员会批准。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:在40℃的环境中对冻存的乳腺癌MCF-7细胞进行火浴处理(40℃)，之后进行充分摇晃，将摇晃均匀的乳腺癌MCF-7细胞置于2 ml的培养基(10%PBS、1%双抗(青链霉素)RPMI-1640培养基500 ml)之内，之后使用2 000 r/min的离心机进行离心处理，进行重悬处理后将细胞传代，使用CO2培养箱对培养基培养24 h、换液，细胞融合率达90%后传代。

    1.2.2 慢病毒载体构建及分组:GIT1基因序列根据质粒特点进行引物设计，引入SacⅠ酶切位点(由上海生工生物工程技术服务有限公司完成)，GIT1下游序列：5’-GGTTGACTGGCAGGAAGG-3’。GIT1上游序列：5’-ATGGATGTGTATGACGAAGTG-3’。正反链混合后加入退火缓冲液，96℃反应4 min，室温冷却，生成双链 ......