陈先平 窦红珍 刘庆丰 宋志东 陈康

    膀胱癌是泌尿系统中最为常见的恶性肿瘤，男性发病率显著高于女性。膀胱癌具有时间上反复发作和空间上多中心性的特点，并且具有局部浸润转移、术后复发率高的生物学特点[1]。微小RNA(miRNA)是真核生物以及某些大型病毒中存在的，长度为20～24个核苷酸的一类内源性非编码单链小分子RNA。miRNA具有调节性，可与mRNA的3’UTR互补结合，使mRNA的翻译被抑制或导致mRNA的稳定性降低，从而负调节mRNA的表达[2]，进而调控细胞发育、分化以及凋亡等多种生物学功能[3]。miRNA表达的异常以及生物合成的紊乱是许多癌细胞的重要特征，研究表明，不同的miRNA在肿瘤发生过程中发挥抑癌或致癌的不同功能[4]。例如miRNA-143可以抑制结直肠癌细胞的侵袭能力，而miRNA-15a的下调或缺失会导致抗凋亡基因bcl2的表达量升高，引起淋巴瘤和白血病的发生[5]。本研究通过对膀胱癌组织和T24细胞株的研究，探讨miRNA-217对T24细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其可能的作用机制，为临床治疗膀胱癌提供新的思路。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2017年12月至2018年4月于我院接受手术治疗的80例膀胱癌患者癌组织及距离癌组织超过2 cm处的正常组织，用以上组织构建膀胱癌组织芯片。在免疫组织化学染色后有16例组织标本出现不同程度缺失，其余64例标本经组织病理学检测证实为原发性膀胱癌，并纳入研究。其中男28例，女36例；年龄40～75岁，平均年龄(54.01±6.21)岁；术前患者均未进行放化疗。所有患者同意本研究并签署知情同意书，且经我院伦理委员会审核批准后收集标本。

    1.2 材料 人源膀胱癌细胞株T24购自上海博古生物技术有限公司。慢病毒过表达载体RSK4-miRNA-217、阴性对照RSK4-NC及miRNA-217、U6引物均由上海吉玛制药技术有限公司设计完成。DMEM培养基(D777)、蛋白定量试剂盒于TOYOBO采购；Trizol reagent(9009)采购自TaKaRa；ECL化学发光试剂盒购自美国 Advansta、Transwell小室采购自BD；抗体购自碧云天有限公司；10～12周无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级雄性 SD 大鼠，体重200～230 g，购自北京维通达生物技术有限公司[生产许可证号：SYXK(京)2017-005]，裸鼠实验遵循动物保护和做好动物福利规定，并经实验动物伦理委员会批准。苏净Airtech超净工作台；三洋 MCO-15AC细胞培养箱；尼康 Ti-U/Ti-s倒置荧光显微镜；艾本德5810R 型高速离心机；罗氏 R480实时荧光定量PCR仪；蔡司LSM710共聚焦激光扫描显微镜 ......