李修志 李加鹏

    目前，外科手术仍是肿瘤治疗的重要手段，但术后出现的复发和转移是影响治疗的重要因素。因此，如何在围术期抑制肿瘤细胞的恶性增殖和转移一直是学者们研究的重要课题。麻醉药是手术过程中不可或缺的存在，其对肿瘤细胞的影响逐渐引起人们的关注。七氟醚是一种广泛应用于实体瘤切除手术麻醉诱导和维持的吸入麻醉剂，在肿瘤围手术期发挥着重要作用。大量研究显示，七氟醚对乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌和肺癌等恶性肿瘤细胞增殖和侵袭等具有一定的抑制作用[1-4]。微小RNAs(miRNAs)是一类与肿瘤发生发展关系密切的小分子RNA，在肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移等生物学过程中发挥着重要作用。已有研究证实，七氟醚可通过调控miRNAs的表达影响结直肠癌和胶质瘤等肿瘤细胞的生物学过程[5,6]。miR-34a在乳腺癌组织和细胞中异常低表达，其过表达可抑制癌细胞增殖和侵袭[7]；七氟醚被证实可通过上调miR-34a的表达抑制胃癌和结肠癌的发生发展[8,9]，但其是否通过调控miR-34a表达影响乳腺癌细胞的恶性进展尚不清楚。本研究以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象，通过观察七氟醚对MDA-MB-231细胞中miR-34a表达的影响，探讨miR-34a是否以及如何参与七氟醚抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 人乳腺癌MDA-MB-231细胞株(中国科学院上海细胞所细胞库)，miR-34a模拟物、miR-34a抑制剂及其相应的阴性对照miR-NC和anti-miR-NC(广州瑞博生物)，青链霉素、胰酶消化液、胎牛血清、DMEM培养基(美国GIBCO公司)，二甲基亚枫和MTT试剂(美国Sigma公司)，HMGB1单克隆抗体和β-actin 单克隆抗体(美国Santa Cruz 公司)，Matrigel (美国BD公司)，PVDF 膜(美国Millipore公司)，引物(上海英骏生物)，发光底物 ECL、BCA蛋白检测试剂盒、逆转录试剂盒和双荧光素酶报告基因检测试剂盒(碧云天生物公司)，Transwell 小室(美国Corning公司)，七氟醚挥发罐(美国Abott公司)。

    1.2 细胞培养及七氟醚处理 采用含有10%胎牛血清、100 U/ml青链霉素的DMEM培养基于37℃、5%CO2的细胞培养箱中常规培养MDA-MB-231细胞。将对数生长期的MDA-MB-231细胞以适当密度种植于96孔细胞板上，培养箱内常规培养过夜。将其分为对照组、1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚组 ......