龚妙添 杨桂生 黄仕尧

    宫颈癌(cervical cancer)是世界八大恶性肿瘤之一，在女性恶性肿瘤中发病率居第二位，仅次于乳腺癌，据统计，全球每年宫颈癌新发病例约有53万例，死亡病例达27万[1]。宫颈癌的发病原因已逐渐明确，该病主要是由于高危型人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的持续感染，引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，形成上皮内瘤[2]。根治性子宫切除术及辅助性放化疗是宫颈癌的主要治疗方式，可以在一定程度上提高宫颈癌患者的生存率，但多数转移性宫颈癌患者预后较差，并且随着放射治疗剂量的累积，肿瘤对于放射的敏感性减弱，严重影响放疗效果[3,4]。汉防己甲素(tetrandrine，Tet)是由中药粉防己的块根提取，又被称为粉防己碱，是一种双苄基异喹啉类生物碱，Tet为天然的非选择性钙离子通道阻滞剂，具有抗高血压、抗炎和抗纤维化等作用[5]。已有研究表明，Tet具有抗癌作用，在结肠癌[6]、膀胱癌[7]和肝癌[8]等疾病中，Tet可以抑制癌细胞的增殖、迁移侵袭，促进其凋亡，逆转上皮间质转化。为研究汉防己甲素在宫颈癌中的作用，本文通过体外培养宫颈癌Hela细胞的方法，探究汉防己甲素对宫颈癌细胞的增殖、凋亡和放射敏感性的影响，并探讨其作用机制，旨在为宫颈癌的治疗提供新理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人宫颈癌细胞株Hela购自ATCC；DMEM培养基购自Gibco；胎牛血清、青霉素、链霉素购自杭州四季青公司；胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、汉防己甲素购于美国Sigma公司；Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE试剂盒购自碧云天生物技术公司；反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司；PVDF膜、RIPA裂解液、ECL发光液购自北京Solarbio公司；吉姆萨(Giemsa)染液购自Applichem公司；control siRNA和Chk1 siRNA由山东维真生物科技有限公司设计合成；兔抗人Chk1多克隆抗体、兔抗人GAPDH多克隆抗体、HRP标记的山羊抗兔IgG购自Abcam公司 ......