丁秀丽 祁秀丽 王誉霖

    阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病严重威胁着人们的生命健康和生活质量，这些中枢神经系统疾病的发生与炎症关系密切[1]。星形胶质细胞具有营养神经元、支持神经元、免疫调节以及信号传递的作用，其是胶质细胞中分布最广泛、体积最大的一类细胞[2]。研究显示，星形胶质细胞炎症发生与细胞内基因表达有关，并且这些基因可能是改善炎症的重要靶标[3]。miRNA是在真核生物体内具有多种生物学作用的非编码RNA，其没有开放阅读框，大小约为22个核苷酸，参与调控细胞分化、衰老、代谢等过程[4]。miRNA能够通过影响下游靶基因的表达影响多个病理、生理过程[5]。研究报道显示，miR-129-5p参与肿瘤、动脉粥样硬化等疾病发生[6,7]。既往的文献显示，上调miR-129-5p能够减轻阿尔茨海默病大鼠神经损伤，抑制炎症发生[8]。高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)是一个在各种细胞中表达的DNA结合蛋白，在组织损伤中发挥促进作用，其表达上调后可以诱导炎症发生[9]。在星形胶质细胞中发现，HMGB1表达升高后细胞释放炎性因子水平升高，HMGB1是一个促星形胶质细胞炎性因子[10]。本实验探讨miR-129-5p对脂多糖(lipopolysaccharides， LPS)诱导的星形胶质细胞炎性介质的影响和机制，为临床上靶向基因抑制神经性炎症提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料 出生2 d的SD大鼠由辽阳森科生物工程有限公司提供；HMGB1抗体购自美国GeneTex；miR-129-5p mimics和mimics control由百奥迈科生物技术有限公司构建；引物由武汉金开瑞生物工程有限公司合成；LPS购自北京索莱宝科技有限公司；IL-6检测试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司；IL-1β检测试剂盒购自上海纪宁酶联科技有限公司；TNF-α检测试剂盒购自上海恒远生物科技有限公司；NO检测试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司；WT和MUT由上海康颜生物科技有限公司构建。

    1.2 星形胶质细胞分离培养 在无菌条件下取大鼠大脑皮层组织，放在含有D-Hanks液的培养液皿内，在显微镜下取出脑膜、血管组织并弃掉，收集大脑皮层组织，用D-Hanks液洗涤2次。用眼科剪把大脑皮层组织剪碎成大小约为1 mm3的组织块，在组织中添加0.125%的胰蛋白酶，放在37℃消化。用200目的网筛过滤 ......