王康浴 王裕洲 陈海鹏 李国良 邓国磊

    口腔癌是常见的恶性肿瘤，主要是发生于口腔上皮细胞，其中有80%属于鳞状上皮细胞癌，在全球常见肿瘤中居于第六位[1]。口腔癌的发病因素复杂，长期饮酒、吸烟、营养不良、口腔卫生差等都会可能引发口腔癌[2]。近年来我国口腔癌发病率呈上升趋势，由于口腔癌早期发病隐蔽无特异性表现，大部分患者确诊是已发展成中晚期[3]。目前口腔癌的五年生存期超过60%，早期诊断，早期治疗，对提高患者的生存质量和生存时间有重要意义[4,5]。本文研究中设计实验，通过上调miR-34细胞对口腔癌细胞进行实验，旨在探究上调miR-34对口腔癌细胞增殖、凋亡能力及周期分布的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 研究细胞：口腔癌细胞(中国医学科学院)。大鼠抗小鼠Bcl-2抗体(Sigma 公司)；免疫小鼠Bax抗体(BD公司)；小鼠抗大鼠caspase3抗体(Gibco公司)；免疫大鼠MMP-9、ICAM-1抗体(Hyclone公司)。本实验获医院伦理委员会批准。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:在40℃的环境中对冻存的口腔癌细胞进行火浴处理(40℃)，之后进行充分摇晃，将摇晃均匀的口腔癌细胞置于2 ml的培养基(10%PBS、1%双抗(青链霉素)RPMI-1640培养基500 ml)之内，之后使用2 000 r/min的离心机进行离心处理，进行重悬处理后将细胞传代，使用CO2培养箱对培养基培养24 h、换液，细胞融合率达90%后传代。

    1.2.2 慢病毒载体构建及分组:miR-34基因序列根据质粒特点进行引物设计，引入SacⅠ酶切位点(由上海生工生物工程技术服务有限公司完成)，miR-34下游序列：5’-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3。GIT1上游序列：5’-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3。正反链混合后加入退火缓冲液 ......