殷亮亮 李春年

    牙髓是位于牙髓腔内的疏松结缔组织，因此牙髓一旦受到微生物的感染，易引发牙髓根尖周病，对牙根未发育完成的年轻恒牙，临床上传统治疗方法是根尖诱导成形术和根尖屏障术[1]。但二者都不能使牙根继续发育，往往造成冠根比例失调，根管壁薄弱等不良预后。随着组织工程、生物材料的发展以及牙髓干细胞的成功培养，牙髓血运重建技术已成为恒牙发生牙髓病、根尖周疾病后的理想治疗方法。支架是牙髓组织工程重要的组成部分，浓缩生长因子(CGF)是第三代血小板聚集物，与前两代血小板浓缩制品相比，CGF具有更好的再生能力和多功能性[2-5]。牙髓再生治疗的根管化学预备与常规根管不同，使用冲洗液时不仅要考虑到其杀菌作用，还应注意减小冲洗液的细胞毒性，保护进入根管中的干细胞，同时应注意冲洗对根管壁释放生长因子的影响。目前临床上常用的根管冲洗剂包括抗菌剂次氯酸钠、氯己定以及金属螯合剂EDTA等。因此，通过本研究观察CGF对于牙髓细胞增殖和分化的作用，探索CGF在牙髓血运重建术中的作用，并探究使用不同的根管冲洗液处理根管的效果，观察冲洗后的根管对牙髓细胞贴附根管壁的影响，以期对提高牙髓血运重建术的预后有积极的指导意义。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 口腔颌面外科门诊因正畸需要拔出的前磨牙或智齿。纳入标准：患者年龄为14～18岁，未做过充填治疗和牙髓治疗，无龋坏，无根裂。

    1.2 仪器与试剂

    1.2.1 主要实验仪器设备：细胞培养箱，美国Thermo公司；超净工作台，Thermo Eleetron公司倒置相差显微镜，德国ZEISS公司；Synergy-TH酶标仪，美国Biotech公司；低温高速离心机，美国Thermo公司；YP2001N电子天平，上海精密科学仪器有限公司；低速离心机，北京医用离心机厂；高压蒸汽灭菌器，日本松下健康医疗器械株式会社。

    1.2.2 主要实验器材：25 cm2培养瓶，ThermoFisher，美国；75 cm2培养瓶，ThermoFisher，美国；6孔细胞培养板，美国Corning公司；96孔细胞培养板，美国Corning公司。

    1.2.3 主要试剂：胎牛血清，以色列BI公司；高糖DMEM培养液，美国Gibico公司；青、链霉素混合液，以色列BI公司；胰蛋白酶，美国Gibico公司；PBS磷酸盐缓冲液，以色列BI公司；CCK-8试剂盒，中国碧云天生物技术研究所；碱性磷酸酶(ALP)试剂盒，中国碧云天生物技术研究所；次氯酸钠，朗力生物医药有限公司；17%EDTA溶液，朗力生物医药有限公司；0.2%氯己定 ......