赵玺 李向宇 丁锐 赵浩然 米丛波 吴晓琴

    hPDLF细胞是牙周膜的重要功能细胞，其主要功能为：调节牙周组织稳态，形成胶原结构蛋白，发挥天然免疫防御的调节功能[1-3]。在口腔正畸治疗中，hPDLF细胞可发挥重要的中介作用，并且是正畸治疗中压槽改建的直接效应细胞[4]。有研究表明，雌激素可调控在骨重建过程中具有重要调控作用的细胞因子的表达，并且牙周膜成纤维细胞存在雌激素受体β(ERβ)基因的表达[5,6]。亦有研究表明，ERβ能够参与hPDLF细胞成骨分化等过程[7]，那么雌激素是否能够通过诱导ERβ的表达而影响下游相关的信号通路的激活笔者尚未见相关研究，所以，本文探究了雌激素对hPDLF细胞骨改建的影响，并且探究其机制，旨在为临床的研究提供帮助。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 健康正畸患者拔除的前磨牙6颗(经患者知情并同意)；DMEM高糖培养基(美国Gibco公司)；17β-雌二醇(美国Sigma公司)；cDNA合成试剂盒、qPCR检测试剂盒(福麦斯生物技术有限公司)；酶标仪(美国BioTek公司)；实时定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)；Vimentin、CK18、ER-β、ERK1/2、GAPDH一抗、山羊抗兔二抗、荧光二抗(武汉三鹰生物技术有限公司)；CCK8试剂盒(沈阳万类生物技术有限公司)；siRNA转染试剂盒(福麦斯生物技术有限公司)；BCA蛋白定量试剂盒(沈阳万类生物技术有限公司)。

    1.2 细胞分离与培养 将所获得正畸患者的牙齿迅速转移至超净工作台中，用手术刀刮取根中1/3的牙周膜，加入0.1%的Ⅰ型胶原酶与牙周膜组织混和均匀，于37℃的水浴锅中震荡消化40 min，然后使用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基稀释，并接种于细胞培养皿中，于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，隔天换液，培养至细胞汇合率达80%时，使用0.25%的胰蛋白酶消化，并传代。

    1.3 免疫荧光 本文使用免疫荧光鉴定hPDLF细胞的标志蛋白波形丝蛋白(Vimentin)和细胞角蛋白(CK18)，主要步骤为：将hPDLF细胞接种于24孔板中，培养至细胞完全贴壁，去除培养基后用PBS清洗3次，然后加入4%的多聚甲醛溶液固定15 min ......