杨庆华 杨隆良 杨晓莉

    阿尔茨海默病(AD)是一种常见于老年人的复杂中枢神经系统的慢性退行性疾病，表现为记忆丧失、认知和行为功能的永久性损害以及各种精神障碍，是导致老年人痴呆的主要原因。随着全球人口老龄化发展，AD发病率逐年增加，已成为一种普遍的健康问题[1]。由于对AD发生、进展机制认识有限，目前临床仍缺乏有效方法来阻止或延缓疾病进展。长链非编码RNA(lncRNA)作为表达遗传调控分子通过染色质修饰、转录调控等多种方式发挥生物活性，参与调控细胞存活、凋亡、氧化应激、炎性反应等多种病理生理过程，在包括AD在内的等多种神经退行性疾病发挥作用[2,3]。研究显示lncRNA Gm4419在糖尿病肾病中表达上调，敲低其表达可抑制炎性反应[4]。Gm4419通过激活NF-κB信号上调趋化素表达诱导神经细胞凋亡进而促进高血压性脑动脉硬化恶化[5]。然而Gm4419在AD进展中的作用和分子机制并不清楚。miR-703是一种心肌梗死保护性miRNA，研究显示miR-703通过抑制心肌细胞焦亡保护缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤[6]。序列分析发现miR-703是Gm4419的潜在靶基因，但Gm4419是否靶向miR-703参与AD进展尚未有研究。β-淀粉样肽25-35(Aβ25-35)是一种短分子片段，具有全长肽的毒性，其诱导的PC12细胞损伤在AD体外研究中已广泛应用[7,8]。因此，本研究重点探讨Gm4419和miR-703对Aβ25-35诱导的PC12细胞氧化应激和细胞凋亡的影响，分析二者靶向调控关系，以期为防治AD提供有效靶点。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12购于中国科学院上海细胞库；Aβ25-35(取适量Aβ25-35溶于无菌三蒸水中制成1 mmol/L储存液，-20℃冰箱避光保存备用)购于上海樊克生物科技有限公司；逆转录酶、SYBR green master mix购于大连宝生物公司；小干扰RNA(si-RNA)、miRNA模拟物(mimics)、miRNA抑制物(anti-miR)、过表达载体(pcDNA-RNA)由广州复能基因公司提供；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)试剂盒购于北京博奥森生物；兔源B细胞淋巴瘤(Bcl-2)抗体、兔源Bcl相关x蛋白(Bax)抗体、兔源磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体购于上海碧云天生物公司；超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒、丙二醛(MDA)含量测定试剂盒购于北京索莱宝生物科技公司 ......