郭伟 黎艳晖 陈亮 李琪

    脓毒症是一种严重危及生命的疾病，是全球住院患者死亡的主要原因。内皮细胞是心脏和血管系统的基本组成部分，其形成血管内皮并维持血管稳态[1]。细菌内毒素、炎性因子等刺激可引起血管内皮细胞功能障碍，导致血管屏障功能丧失，进而参与包括脓毒症在内的多种疾病发生和进展[2]。因此，明确内皮细胞损伤的分子机制为开发新的脓毒症治疗策略至关重要。微小RNA(miRNA)是一种非编码小分子RNA，参与转录后基因表达的调控，越来越多的研究证实其在微调或维持血管内皮功能中具有关键作用[3,4]。研究显示脓毒症患者外周血中miR-25-3p表达降低，恢复其表达可降低巨噬细胞迁移能力，抑制炎性细胞因子分泌[5]。去整合素金属蛋白酶15(ADAM15)是由5个胞外结构域和一个包含Src同源对接位点组成的跨膜蛋白，其在调节细胞、基质粘附和信号传导中具有重要功能。研究指出ADAM15表达增加可提高血管内皮通透性，促进炎性细胞迁移，导致脓毒症过程中的内皮屏障功能障碍[6]。本研究通过starbase在线分析发现ADAM15是miR-25的潜在靶点，于是推测miR-25-3p可能靶向ADAM15在脓毒症内皮细胞损伤中发挥作用。脂多糖(LPS)已被证实是导致脓毒症血管内皮损伤主要致病因素[7]，本研究以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象，探讨miR-25-3p靶向ADAM15对LPS诱导的HUVEC损伤的影响，以期为临床脓毒症治疗提供新的见解。

    1 材料与方法

    1.1 材料 HUVEC购于上海奥陆生物科技公司；逆转录试剂盒、SYBR Green PCR Master Mix购自大连Takara公司；miRNA逆转录试剂盒、miRNA分析试剂盒购于美国ABI公司；噻唑蓝(MTT)购于上海贝博生物；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡检测试剂盒购于杭州联科生物公司；丙二醛(MDA)含量检测试剂盒以及乳酸盐脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性检测试剂盒购于北京索莱宝公司；兔源ADAM15、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、β肌动蛋白(β-actin)、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)单克隆抗体以及羊抗兔IgG第二抗体购于上海艾博抗公司；miR-25-3p模拟物(mimics)及其对照(miR-con)、miR-25-3p抑制物(anti-miR-25-3p)及其对照(anti-miR-con)、ADAM15小干扰RNA(si-ADAM15)及其对照(si-con)、空载体质粒(pcDNA)、ADAM15过表达载体(pcDNA-ADAM15)以及荧光素酶报告载体购于广州锐博公司 ......