丁志刚

    骨关节炎是一种多发生于中老年人的炎症性关节疾病，严重影响中老年人的生活质量。骨关节炎病理变化主要表现为关节软骨组织退化、软骨细胞消失、软骨下骨反应性增生和关节滑膜组织炎性反应等[1,2]。软骨细胞是软骨内唯一存在的细胞成分，在维持软骨正常功能和形态中发挥重要作用[3]。目前，骨关节炎的发病机制尚未明确。有研究表明，软骨细胞损伤是骨关节炎发生发展的重要原因，降低软骨细胞损伤对于骨关节炎的治疗具有重要意义[4]。咪达唑仑是γ-氨基丁酸A受体激动剂，具有镇痛、镇静等功效。研究表明，咪达唑仑可通过调控JAK2/STAT3信号通路促进氧糖剥夺诱导的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡[5]；咪达唑仑预先给药可能通过抑制细胞炎性反应和细胞凋亡减轻小鼠肠缺血再灌注损伤[6]。miR-382-3p是一种微小RNA(miRNA)，参与调控细胞增殖、凋亡和炎性反应等生理或病理过程，与多种疾病的发生发展密切相关[7,8]。Lei等[9]研究显示，白介素1β(IL-1β)的刺激可导致软骨细胞中miR-382-3p的表达下调，上调miR-382-3p通过靶向CX43调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎性反应。因此，本研究采用IL-1β诱导小鼠软骨细胞ATDC5建立软骨细胞损伤模型，主要探讨咪达唑仑对IL-1β诱导的软骨细胞炎性因子表达和凋亡的影响及其能否调控miR-382-3p发挥作用。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 小鼠软骨细胞株ATDC5，上海雅吉生物科技有限公司；咪达唑仑，江苏恩华药业有限公司；IL-1β，美国Sigma公司；胎牛血清(FBS)，浙江天杭生物科技公司；RPMI 1640培养基、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒和二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒，北京索莱宝公司；LipofectamineTM2000试剂盒和Trizol试剂，美国Invitrogen公司；miR-382-3p模拟物(mimics)、模拟对照序列(miR-NC)、miR-382-3p抑制剂(anti-miR-382-3p)、抑制剂阴性对照序列(anti-miR-NC)和PCR引物 ......