田婉婷

    胃癌是全球常见恶行肿瘤之一，据报道，2013年全球约有73.8万人死于胃癌，胃癌患者预后差[1,2]。胃癌的临床标志是异质性，从自发消退到快速疾病进展和死亡。尽管胃癌治疗近期有治疗效果改善，但整体5年生存率仍然很低。在诊断时，73%的胃癌患者已经发生恶性病变[3]。虽然已经发现多种遗传和分子病变与胃癌发生有关，但是这种肿瘤的分子机制仍然知之甚少。微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA分子，长度为19～25个核苷酸，通过靶向mRNAs在转录后调节基因表达[4]。miRNA与靶mRNA的30-非翻译区(30-UTR)结合，导致mRNA的翻译抑制或降解。此外，单个miRNA可以调节多个mRNA，单个mRNA也可以被许多miRNA靶向调控。miRNA可能作为癌症的新治疗策略，因为它们可以作为肿瘤抑制因子或依赖于靶mRNA的癌基因[5,6]。研究报道miR-329在肝癌、肺癌等癌组织和组织中显著下调[7]。赖氨酸特异性脱甲基酶1(the 30-UTR of lysine-specific demethylase 1，KDM1A)是含有组蛋白去甲基化酶的KDM1家族成员。研究证实，KDM1A在肿瘤进展中起重要作用，KDM1A在人乳腺癌细胞系和原发性乳腺癌中的表达上调[8]；KDM1A可促进癌细胞的上皮-间质转化(EMT)；KDM1A高表达导致EC细胞生长，球形成和侵袭能力受到促进。对于胃癌，研究表明KDM1A在胃癌中的表达显着上升，而KDM1A的过表达可促进体外细胞的生长和转移[9]。这些结果显示KDM1A可能是胃癌中的肿瘤促进因子。然而，KDM1A在胃癌细胞中的调节机制以及与miR-329的关联仍有待完全阐明。本研究探讨miR-329通过负性调节KDM1A抑制胃癌细胞增殖及侵袭的机制，为胃癌的治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养与分组 本研究前期预试验测定miR-329在NCI-N87、CRL-5822、BGC-823、HGC-27及胃正常上皮细胞中的表达情况，miR-329在BGC-823、胃正常上皮细胞中的表达有差异，在CI-N87、CRL-5822、HGC-27、胃正常上皮细胞表达无差异。故选择BGC-823为研究对象。人胃腺癌细胞系(BGC-823)和获自中南大学湘雅医学院细胞中心，将所有细胞系在含有10%胎牛血清(FBS；thermo fisher)的DMEM(thermo fisher，carlsbad，CA，USA)中于37℃在含有5%CO2的潮湿培养箱中培养。

    1.1.1 分组设计：BGC-823癌细胞组(转染阴性对照 siRNA)：取10 ml BGC-823胃腺癌细胞液于10%胎牛血清的DMEM培养液中 ......