谢玉瑾 宋雪云 马永春

    结核的重要病原菌是结核分枝杆菌(MTB)，属于典型胞内菌感染，MTB侵入机体后可发展为活动性肺结核，机体通过分泌前炎因子而清除病原菌感染，但前炎因子可进一步加重机体损伤，因而减少炎性因子的释放，可有效改善持续性病原菌感染[1]。研究表明药物可发挥抗炎作用从而减轻MTB诱导的炎性反应[2,3]。甲基莲心碱属于双苄基异喹啉生物碱，具有抗氧化、抗炎等作用，并可通过调节线粒体膜电位从而调控细胞凋亡，还可抑制骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡[4]。但笔者查阅文献后发现关于甲基莲心碱对MTB诱导的人单核细胞(THP-1)凋亡及炎性反应的影响尚未可知。微小RNA(miRNA)在MTB诱导的人巨噬细胞中表达异常，并可调控细胞凋亡[5]。但miRNA在甲基莲心碱调控MTB诱导的THP-1细胞凋亡及炎性反应过程中的作用机制尚未阐明。BCG诱导的巨噬细胞中miR-3619-5p的表达水平降低，并可能参与病原菌感染过程[6]。但甲基莲心碱是否可通过调控miR-3619-5p的表达从而抑制病原菌感染尚未可知。因此，本研究采用MTB诱导THP-1源巨噬细胞建立细胞损伤模型，探讨甲基莲心碱对MTB诱导THP-1源巨噬细胞凋亡及炎性反应的影响，探究其对miR-3619-5p的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人单核细胞THP-1购自上海中科院细胞库；甲基莲心碱购自购自北京索莱宝科技有限公司；Trizol、反转录试剂盒、qRT-PCR试剂购自北京天根生化科技有限公司；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-10检测试剂盒购自美国eBioscience公司；佛波酯(PMA)、细胞凋亡试剂盒购自美国Sigma公司；结核分枝杆菌(MTB)、MTB培养基购自美国BD公司；兔抗人Bax、Bcl-2抗体购自美国Santa Cruz公司；HRP标记的山羊抗兔IgG二抗购自美国Abcam公司；miR-con、miR-3619-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-3619-5p购自广州锐博生物技术有限公司；Lipofectamine2000试剂购自美国Invitrogen公司 ......