邓鸿杰 谭娟 陈绍平

    气道重构是慢性气道疾病的主要表现特征，涉及气道壁细胞的组成和功能改变，可导致不同程度的不完全可逆且进行性加重的气流受限，使相关疾病的治疗复杂化[1]。气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell，ASMC)是涉及气道的结构细胞，在受到生长因子、炎性递质等外界信号刺激后恶性增殖，进一步释放促炎、抗炎因子加重气道炎性反应及气道重构[2,3]。蛋白激酶B(protein kinase B，AKT)信号通路是人体内的基础信号转导通路之一，可调控下游核因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)调控炎性反应及细胞的增殖、凋亡[4,5]。研究显示，AKT/NF-κB/cyclin D1信号通路与胆脂瘤上皮细胞增生的调控有关，在小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞数量、功能改变中发挥重要作用[6,7]。白果内酯是从银杏叶中提取的倍半萜类化合物，具有抗炎、抗氧化活性，可通过NF-κB通路减轻非酒精性脂肪肝炎大鼠肝纤维化程度[8]。组胺作为常见的炎性介质，可介导慢性炎性反应，影响呼吸道上皮屏障功能[9]。本研究采用组胺诱导ASMC模拟气道重构过程中的炎症环境，探讨白果内酯对组胺诱导的ASMC AKT/NF-κB/cyclin D1信号通路及凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 人ASMC细胞(货号：FE992)购自美国ATCC细胞库；胎牛血清(货号：FBS500-S)购自澳大利亚AusGeneX公司；DMEM培养基(货号：KL-P0032)购自德国merck/sigma公司；组胺、白果内酯(货号：D2466、D0166)购自上海宝曼生物科技有限公司；MTT溶液(货号：N/A-896)购自美国AMEKO公司；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(货号：S0185)购自哈尔滨新海基因检测有限公司；p-AKT抗体、AKT抗体、p-NF-κB p65抗体、NF-κB p65抗体、cyclin D1抗体、GAPDH抗体(货号：ab32505、ab192623、ab183559、ab32536、ab16663、ab181602)购自abcam公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔(货号：0295G-HRP)购自美国santa公司；人白介素-6(interleukin-6 ......