毛忠文 邓秋芳 李静 王新云 甘金城 骆福秀

    心肌缺血再灌注是引起冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)心肌损伤的重要病理机制，其常见于冠心病溶栓等治疗中，有研究表明，在心肌缺血再灌注过程中会产生的大量ROS，是导致再灌注损伤的重要机制[1]。心肌缺血再灌注损伤会导致治疗效益低下，且有多种机制能够参与心肌缺血再灌注损伤，主要包括自噬、内质网应激、血管皮内细胞功能障碍等。自噬是真核细胞中代谢调节的主要机制，能够在缺氧、缺血再灌注等情况下，诱导自噬产生，尤其是在缺血再灌注后会大量产生自噬小体。HIF-1α属于一种转录因子，多存在于线粒体中[2]。硫化氢被认为是一种新型的神经调节因子和信号传递因子，且在多个器官及组织中均有所发现，当机体在病理情况下，其能够发挥抗炎、抗氧化作用且对神经起着保护作用[3]。本文中，建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型，对缺氧诱导因子-1/自噬在心肌缺血再灌注损伤大鼠中的作用，为治疗心肌缺血再灌注损伤提供了新的循证。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 研究动物：选取SPF级SD健康大鼠40只，由常州卡文斯实验动物有限公司提供，鼠龄(3.8±0.3)个月，体重(229.6±11.8)g。大鼠均养殖在干净笼子里，室温(22.1±1.8)℃，相对湿度35%～40%，每天光照12 h，喂饮纯净水，饲养时间1周。本研究所做实验均获得我院伦理委员会批准。

    1.1.2 主要试剂：人抗大鼠LDH抗体(圣克鲁斯生物技术有限公司)；大鼠抗小鼠HIF-1α抗体(上海优宁维生物科技有限公司)；小鼠抗大鼠LC3Ⅰ抗体、人抗大鼠LC3Ⅱ抗体(北京泰泽瑞达科技有限公司)；兔抗大鼠P62抗体(艾美捷科技有限公司)；兔抗小鼠Beclinl-1抗体(上海信裕生物工程有限公司)；SOD ELISA试剂盒、cTnT ELISA试剂盒、CK-MB ELISA试剂盒(上海抚生实业有限公司)；MDA ELISA试剂盒(上海纪宁生物科技有限公司)；T-AOC ELISA试剂盒(上海信裕生物科技有限公司)。

    1.2 方法 随机选取40只大鼠中10只作为对照组(C组)，10只作为预处理组(H组)，注射5 μmol/kg的硫化氢于大鼠左侧肾动脉，剩余20只大鼠采用覃琴等[4]诱导建立体内心肌缺血再灌注(I/R)模型，使用50 mg/kg的戊巴比妥钠将大鼠进行麻醉处理，将导管插入右侧颈内静脉以及颈内动脉以便静脉给药和血气分析、血压检测。切开气管后行气管插管，连接呼吸机行呼气末正压通气，恒温控制仪维持大鼠体温36～37℃ ......