于智轩 高映春

    脓毒症是机体对感染的反应失控导致的危及生命健康的器官功能障碍，其病程发展迅速，具有较高的死亡率[1]。肺脏是脓毒症发生发展时容易受累的器官，严重时可并发急性呼吸窘迫综合征。Ⅱ型肺泡上皮细胞具有分裂增殖能力，参与受损肺泡上皮的修复，维持其完整性[2]。Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤是脓毒症肺损伤的细胞学基础，有效降低或修复Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤是治疗脓毒症的关键。微小RNA(miRNA)是一类参与细胞凋亡和炎性反应等生理或病理过程的小分子非编码RNA，在脓毒症的发生发展中起重要作用[3,4]。研究显示，miR-483-3p在链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠和高糖诱导的心肌细胞中表达上调，过表达miR-483-3p通过转录抑制胰岛素生长因子1加剧心肌细胞凋亡[5]。StarBase生物信息学软件预测显示，磷酸酪氨酸衔接蛋白1(APPL1)可能是miR-483-3p的靶基因。APPL1是与脂联素受体直接结合的衔接蛋白，参与细胞增殖、介导胰岛素信号传递、胞内运输等生理过程。研究显示，过表达APPL1可降低脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡，减轻LPS诱导的心肌细胞损伤[6]。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，可诱导肺泡细胞损伤。因此，本研究观察miR-483-3p对Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响及其能否通过调控APPL1影响Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤，以期为脓毒症急性肺损伤的靶向分子治疗提供新的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞，北京派瑞金生物科技有限公司；胎牛血清(FBS)，美国Hycolne公司；DMEM培养基、LipofectamineTM 2000试剂盒、AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)和双荧光素酶活性检测试剂盒，北京索莱宝科技有限公司；LPS，美国Sigma公司；Trizol试剂，美国Invitrogen公司；miR-483-3p抑制剂(anti-miR-483-3p)、抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)、miR-483-3p 模拟物(mimcs)、模拟对照序列(miR-NC)、APPL1过表达载体(pcDNA-APPL1)、空载体(pcDNA)、APPL1小干扰RNA(si-APPL1)、乱序无意义阴性序列(si-NC)和PCR引物，上海吉玛制药技术有限公司；逆转录试剂盒和PCR试剂盒，日本TaKaRa公司；丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒，南京建成生物工程研究所；APPL1抗体，美国Cell signaling Technology公司；B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)多克隆抗体 ......