庄媛 郝艳丽 黄莺 李延辉 孙颖 李悦 卢云凤 吴涛

    缺血性心脏病是由冠状动脉闭塞或狭窄引起的心血管疾病，是世界范围内致残和死亡的主要原因之一。血流恢复是缓解心肌缺血损伤的有效干预手段，然再灌注本身可导致额外的心肌损伤和病理性重构，即心肌缺血/再灌注(I/R)损伤[1]。因此，减弱I/R导致的心肌损害对改善缺血性心脏病患者预后意义重大。环状RNA(circRNA)是由前体mRNA反向剪切形成的单链封闭环结构的RNA分子，通过与miRNA结合调节靶基因表达发挥功能，与心肌梗死、心脏衰老、心脏肥大、动脉粥样硬化发生关系密切相关，是心血管疾病治疗的理想靶点[2,3]。circRNA 0000285(circ_0000285)是一种致癌基因，研究发现糖尿病肾病小鼠和高糖诱导的肾足细胞中circ_0000285表达升高，干扰circ_0000285表达减弱高糖诱导的足细胞损伤[4]。生物信息学预测显示，miR-625是circ_0000285的潜在靶点。miR-625对心肌肥厚具有抑制作用[5]。然而，circ_0000285是否靶向miR-625在心肌I/R损伤中发挥作用并不明确。本研究构建心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型模拟I/R损伤过程，探讨circ_0000285对H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的影响，分析其机制是否与调miR-625表达相关。

    1 材料与方法

    1.1 材料 大鼠心肌细胞H9C2购于中国典型培养物保藏中心；miRNA检测试剂盒购于美国GeneCopoeia公司；逆转录试剂盒、SYBR-Green PCR试剂盒购于北京天根生化科技公司；针对circ_0000285的小干扰RNA(si-circ_0000285)及其阴性对照(si-NC)、miR-625模拟物及(mimics)其阴性对照(miR-NC)、miR-625抑制物(anti-miR-625)其阴性对照(anti-miR-NC)、双荧光素酶报告载体由北京六合华大基因公司提供；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)凋亡检测试剂盒购于上海锐赛生物公司；丙二醛(MDA)含量检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性检测试剂盒北京索莱宝科技有限公司；兔源B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体和羊抗源IgG二抗购于美国Abcam公司 ......