宿晶 王吉磊 刘世宾

    肾间质纤维化(RIF)是糖尿病肾病(DN)最常见特征之一，其在糖尿病肾损伤早期出现，是DN等慢性肾病发展为终末期肾病的最终共同途径。因此，探讨RIF进展的分子机制对开发有效的DN治疗策略意义重大。长链非编码RNA(lncRNA)定义为一类长度超过200核苷酸蛋白编码潜能缺失的RNA转录本，其可在转录和转录后水平调节基因表达广泛参与表观遗传调控、细胞周期、细胞分化、凋亡等生物学过程[1]。lncRNAs的异常表达与包括DN在内的多种疾病进展有关[2]。生长抑制特异性转录本5(GAS5)是一种lncRNA，研究指出2型糖尿病患者外周血单核细胞中GAS5表达显著升高[3]。淋巴管内皮细胞中GAS5的表达差异可能与糖尿病相关并发症发病机制有关[4]。然而GAS5在RIF中的作用和分子机制鲜有报道。miR-136是一种与多种病理过程相关的非编码RNA，研究指出过表达miR-136显著抑制肾癌、肺癌细胞的上皮间质转化进程[5,6]。本研究通过生物信息学分析发现miR-136是GAS5的潜在靶基因，于是推测GAS5可能通过靶向miR-136参与调控RIF进程。因此，本研究以高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)建立RIF体外细胞模型[7]，探讨GAS5靶向miR-136对高糖诱导的HK-2细胞炎性和纤维化因子表达的影响，以期为改善RIF、延缓DN进展提供有效靶点。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 人肾小管上皮细胞HK-2购于中国科学院上海细胞库；miR-136模拟物(mimics)、抑制物(anti-miR-136)以及相应对照(miR-NC、anti-miR-NC)，GAS5小干扰RNA(Si-GAS5)、过表达质粒(pcDNA-GAS5)以及相应对照(Si-NC、pcDNA)，荧光素酶报告载体购自上海吉玛制药公司；PrimeScript逆转录Master Mix购于大连TAKARA公司；Power SYBR Green PCR Master Mix购于美国ABI公司；IL-6、TNF-α酶联吸附测定(ELISA)试剂盒购于上海康朗生物公司；兔源肌动蛋白α(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN1)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体以及山羊抗兔IgG二抗购于北京博奥森生物公司 ......