黄炜 贺媛 张卫涛

    骨关节炎(osteoarthritis，OA)是最常见的慢性退行性关节疾病，是由关节软骨破坏、软骨下骨改变或滑膜积液引起的，引起关节疼痛和僵硬[1,2]。骨关节炎的流行病学非常复杂，其分子机制仍未完全了解。软骨细胞是维持软骨结构和功能的重要细胞结构，其死亡会破坏胞外基质合成与降解的平衡，从而进一步加剧OA[3]。长链非编码RNA(lncRNAs)是指长度超过200个核苷酸且不具备蛋白质编码能力的RNA分子，已被证实在炎症相关疾病的发生发展中发挥重要作用[4]。研究发现，在MPP诱导的帕金森细胞模型中，lncRNA SNHG14表达上调，下调lncRNA SNHG14通过miR-214-3p/KLF4轴增强细胞活力、抑制细胞凋亡和促炎因子的产生来减轻细胞损伤[5]。在OGD/R诱导的HT22小鼠海马神经元细胞损伤中，lncRNA SNHG14通过miR-182-5p/BINP3轴诱导HT22细胞过度自噬，从而加剧神经元损伤[6]。然而lncRNA SNHG14在骨关节炎中的作用尚不清楚。本实验通过StarBase预测发现lncRNA SNHG14与miR-149-5p具有结合位点。研究报道，下调miR-149逆转了抑制PVT1表达对IL-1诱导的软骨细胞异常代谢功能障碍和炎症的影响[7]。尽管已有研究确定miR-149在骨关节炎中的作用，但lncRNA SNHG14在骨关节炎中的作用及其机制是否与miR-149-5p有关目前还尚未可知。因此，本实验旨在研究lncRNA SNHG14是否通过靶向调控miR-149-5p表达来影响脓毒症炎性反应。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 雄性SD大鼠，购自上海斯莱克实验动物有限公司；碘乙酸纳(MIA)购自美国Sigma公司；DMEM培养液购自上海钰森生物技术有限公司；胎牛血清购自杭州亦博生物科技有限公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自上海晶抗生物工程有限公司；RIPA蛋白裂解液、BCA试剂盒购自上海研谨生物科技有限公司；MDA、SOD、CAT检测试剂盒购自南京建城生物工程研究所；Trizol试剂、反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本Takara公司；Lipofectamine2000购自上海信帆生物科技有限公司。

    1.2 大鼠软骨细胞制备 无菌环境下，小心刮取大鼠双侧膝关节胫骨坪及髌骨内侧透明软骨 ......