张庆军 王辉 张苗苗 毛雯 吴迪

    脓毒症是由感染引起的全身性炎性反应综合征，若未得到有效治疗，将导致脓毒症休克和多器官功能障碍。心脏是脓毒症最常见受累器官，有研究显示重症监护病房(ICU)60%以上脓毒症患者表现为心功能障碍，其死亡率高达70%[1]。匹诺塞林(又称为5,7-二羟基黄酮)是从蜂胶和一些植物中提取的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、血脑屏障保护、神经保护等生物学作用[2-4]。此外，匹诺塞林还可减少缺血再灌注大鼠室性心律失常，减少心肌梗死面积，改善心脏功能[5,6]。然而关于匹诺塞林心肌保护的潜在机制并未完全阐明，匹诺塞林能否用于治疗脓毒症心肌损伤也尚未可知。微小RNA(miRNA)是一类蛋白编码能力缺失的多功能短链RNA，其抑制靶mRNA的翻译或转录参与广泛的心脏病理生理和血管功能。研究显示紫绀型心脏病患者心肌组织中miR-486-5p表达增加，抑制miR-486-5p表达可保护心肌细胞免受缺氧诱导的细胞损伤[7]。然miR-486-5p在脓毒症心肌损伤中的作用并未报道。本研究采用脂多糖(LPS)刺激大鼠心肌细胞H9C2建立细胞损伤模型[8]，观察匹诺塞林对LPS致心肌细胞损伤以及对miR-486-5p表达的影响，旨在揭示匹诺塞林的心肌保护作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 大鼠胚胎心肌细胞H9C2购自美国典型培养物保藏中心；LPS、羟丙基-β环糊精购于美国Sigma-Aldrich公司；匹诺塞林(纯度大于99%)购于中国医学科学院药物研究院；脂质体Lipofectamine 2000、TRIzol试剂购于美国Invitrogen公司；miR-486-5p抑制物(anti-miR-486-5p)及其阴性对照(anti-miR-NC)、miR-486-5p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、miRNA反转录PCR试剂购于广州锐博生物公司；丙二醛(MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒购于上海泽叶生物公司；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin-V-FITC)凋亡检测试剂盒购于北京宝赛生物公司；兔抗大鼠cleaved-caspase3单克隆抗体、兔抗大鼠GAPDH抗体单克隆购于上海碧云天生物公司；兔抗大鼠cleaved-caspase9抗体购于上海艾博抗生物公司；miRNA荧光定量PCR试剂盒购于上海生工生物工程公司 ......