张辉 邸红芹 吴海峰 孙红梅 孟自立 刘战地

    流行性感冒病毒(influenza virus，IFV)是正黏病毒科(Orthomyxoviridae)的代表种，简称流感病毒，为分节段(8个节段)的负链RNA病毒，基于流感病毒核壳蛋白(NP)和基质蛋白(M)抗原决定簇的差异，分为三种不同型：A型、B型和C型，是引起流行性感冒的病原体。流感病毒会造成急性上呼吸道感染，并借由空气迅速的传播，在世界各地常有周期性的流行，特别是对老人和儿童等人群的生命健康造成了重大威胁[1,2]。其中A型流感病毒(influenza virus A，IFA)和B型流感病毒(influenza virus B，IFB)是引起人感染的主要病毒，甲型流感病毒易发生变异，流感大流行就是就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的[3,4]；乙型流感病毒根据抗原特异性和血凝素(HA1)基因的核苷酸序列，可以分为Yamagata和Victoria两大谱系[5]，其感染特点是起病急骤、畏寒发热，体温在数小时至24 h内升达高峰，39～40℃甚至更高，伴头疼，全身酸疼，呼吸道症状较轻，咽干喉痛。流感病毒是国际上第一个全球监测的传染病毒[6]，国家流感中心每周都会报告新发病例及感染病毒类型，但至今尚未完全控制。流感病毒快速、精确及敏感的诊断，可为临床医师早期有效地抗病毒治疗提供依据，同时高危人群可尽早的采取防护措施，减少病毒在人群中流行。传统的检测方法，如鸡胚组织培养接种以及血清学诊断，由于其操作过程繁琐、灵敏度低以及检测时间较长，无法满足快速诊断的要求，并且病毒抗原的变异频率很高、传播快速为流感病毒的精准诊断和有效防控带来极大的困难。病毒简便、精确及敏感的诊断手段就表现得极其重要。近年来，随着分子生物学检测方法的介入，给临床流感病毒诊断和治疗提供很大的帮助，尤其是多重实时荧光定量PCR技术(MRT-PCR)以其高通量、高灵敏性、高特异性及操作快速简便等优势，在流感病毒诊断中有巨大的应用空间[7,8]。多重PCR体系中存在多对引物和探针，在反应过程中容易造成引物探针交叉干扰，导致扩增效率降低，因此，本文基于同源加尾系统(Homo-Taq Assidted Non-Dimer，HAND)建立改良的Taqmam-分子灯标(Taqman-MB)多重实时荧光定量PCR检测IFA和IFB，以甲/乙型流感病毒核酸检测试剂盒(中山达安基因)为参照，评估已构建的改良多重荧光定量PCR体系在临床检测中的效能[9] ......