黄明月 曹旭东 赵春辉

    急性心肌梗死(AMI)是一种致残、致死率较高的心血管疾病，近年其发病率逐年上升，并呈年轻化趋势，已成为一种突出的公共卫生问题。心肌缺血/再灌注(I/R)损伤是限制AMI治疗成功的关键，研究显示在再灌注期活性氧的过量产生可触发急性炎性反应，诱导细胞凋亡，加剧心脏损伤[1]。因此，减少心肌细胞氧化应激、凋亡和炎性反应在临床AMI治疗中具有重要意义。长链非编码RNA(LncRNA)是包含大于200个核苷酸的转录产物，其通过作为miRNA分子诱饵，上调蛋白编码基因表达，参与包括心肌I/R损伤等多种心肌血管疾病进展。先前研究表明，生长阻滞特异性转录本5(GAS5)、牛磺酸上调基因1(TUG1)等多种LncRNA均通过调控miRNA表达加剧心肌I/R损伤[2,3]。LncRNA DLX6-AS1已被证实在结肠癌、喉鳞癌等多种癌症中表达上调并促进癌症恶性转化[4,5]，然而LncRNA DLX6-AS1在心肌I/R损伤中的作用目前并不清楚。Starbase预测到miR-103a-3p是LncRNA DLX6-AS1的潜在靶点。miR-103a-3p已被证实在缺氧复氧诱导的心肌细胞中表达下调，miR-103a-3p表达恢复可减弱心肌细胞自噬和凋亡[6]。因此，LncRNA DLX6-AS1是否靶向miR-103a-3p参与心肌I/R损伤值得探讨。本研究以H2O2诱导的心肌细胞模拟体外心肌I/R损伤过程，旨在明确LncRNA DLX6-AS1靶向miR-103a-3p对H2O2诱导的细胞凋亡、氧化损伤和炎性反应的影响，以期为心肌I/R损伤的治疗提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 大鼠心肌细胞H9C2购于中国典型培养物保藏中心；SYBR Green Real-time PCR Master Mix购于北京索莱生物科技公司；cDNA第一链合成试剂盒、Trizol试剂、Lipofectamine 2000购于美国Invitrogen公司；LncRNA DLX6-AS1的小干扰RNA(si-LncRNA DLX6-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-103a-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、miR-103a-3p抑制物(anti-miR-103a-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC)、LncRNA DLX6-AS1过表达质粒(pcDNA-LncRNA DLX6-AS1)及其阴性对照(pcDNA-NC)、荧光素酶报告载体购于上海吉玛制药公司；丙二醛(MDA)含量测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、乳酸盐脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒购自南京建成生物研究所；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin-V-FITC)凋亡检测试剂盒、双荧光素酶活性测定试剂盒购于北京百奥莱博生物公司；大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒购于上海逸风生物科技公司；兔源裂解的半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)抗体、羊抗兔IgG二抗购于上海艾博抗生物公司 ......