秦霞 姚娟

    肺炎是下呼吸道感染疾病，是5岁以下儿童死亡和发病的重要原因。急性小儿肺炎严重威胁儿童患者的生命[1]。因此，迫切需要阐明婴儿性肺炎的关键机制[2]。最近研究表明，微小RNA(micro RNA,miRNA)可能具有塑造M1和M2巨噬细胞极化平衡的能力并歪曲免疫应答[3]。已经确定了几种miRNA参与了肺炎的发病机制[4]。最近，miR-1247被证明可调节胃癌细胞的生长和迁移[5]。miR-1247的异位表达可以抑制胰腺癌细胞的恶性行为和致瘤性[6]。而且，miR-1247的抑制作用可促进非小细胞肺癌细胞的侵袭和迁移[7]。miR-1247在癌症领域中的作用越来越多，但miR-1247对肺炎发展的影响尚不清楚。巨噬细胞是炎症的起始，传播和消退的主要参与者[8]。触发巨噬细胞的激活对消除入侵的病原体或刺激至关重要[9]。但是，一旦清除了传染性或有害性物质，就必须消除炎症信号，以防止自身破坏。因此，应同时重视巨噬细胞的正确激活和从炎症状态到免疫抑制状态的转变[10]。本文对miR-1247通过靶向CCL16调控肺炎幼鼠巨噬细胞极化和过敏性炎症进行详细研究为婴幼儿肺炎的诊断和治疗提供理论基础和新的见解。

    1 材料与方法

    1.1 动物实验

    1.1.1 实验幼鼠:BALB/C幼鼠购自湖北医药学院动物试验中心[动物合格证号：SCXK(鄂)2021-0008]，并维持在特定的无病原体条件下的医学院动物设施中。所有实验使用年龄和性别匹配的对照小鼠。

    1.1.2 肺炎模型:腹膜内麻醉小鼠，加入盐酸氯胺酮(100 mg/kg)和甲苯噻嗪(10 mg/kg)。气管内滴注miR-1247模拟物(2 mg/kg)。24 h后，在指定的时间段内给予PBS或LPS(1 mg/kg，气管内)。在LPS暴露后24 h处死小鼠，并进行随后的功能分析。在短期研究中，LPS注射3 h后从小鼠收集血液，并测量血清中的细胞因子水平。

    1.1.3 医学伦理学问题:动物实验均根据美国国立卫生研究院实验动物的护理和使用指南，以及杭州师范大学医学院动物护理和使用委员会的批准进行。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养及腹膜巨噬细胞和肺泡巨噬细胞的产生:RAW264.7细胞系获自美国典型培养物保藏中心，并在含有10%(V/V)热灭活的FBS的DMEM(生命技术)中生长。为了制备鼠腹膜巨噬细胞 ......