牛帅帅 孙卓伟 王承群

    骨关节炎是临床常见的一种慢性退行性关节疾病，主要特征为关节软骨退化、滑膜炎症及骨赘形成，目前骨关节炎药物治疗方案较少，同时非药物治疗的方案治疗效果不佳[1]。近年来，中草药在骨关节炎的治疗中发挥重要作用，并可减轻骨关节炎软骨细胞损伤[2,3]。绞股蓝皂苷是葫芦科植物绞股蓝的活性成分，具有抗氧化、保护神经功能等作用，绞股蓝皂苷可促进成骨细胞增殖分化，而抑制细胞氧化应激[4]。绞股蓝皂苷A是皂苷的主要有效成分，但绞股蓝皂苷A与骨关节炎软骨细胞损伤相关研究笔者所见相对较少。长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA中常见类型，其在机体中广泛存在，其表达异常可通过竞争性结合miRNA而参与多种疾病发生及发展，研究表明lncRNA TTTY15在过氧化氢诱导的心肌细胞中表达水平升高，敲低其表达可通过调节miR-98-5p/CRP轴而减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤[5]。生物信息学预测显示TTTY15与miR-335-5p存在结合位点，研究表明miR-335-5p在骨关节炎软骨细胞中表达水平降低，上调其表达可抑制软骨细胞炎性反应[6]。但绞股蓝皂苷A是否可通过调控TTTY15/miR-335-5p通路而影响骨关节炎软骨细胞损伤尚未可知。因此，本研究采用IL-1β诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型，探讨绞股蓝皂苷A对骨关节炎软骨细胞炎症、氧化应激、增殖及凋亡的影响及其对TTTY15/miR-335-5p通路的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 绞股蓝皂苷A购自西安天丰生物；IL-1β购自南京金斯瑞生物；SYBR Green PCR试剂购自德国Qiagen；Trizol试剂、Lipofectamine2000购自美国Invitrogen；逆转录试剂盒购自北京天根生化；TNF-α、IL-6、SOD、MDA检测试剂盒购自南京建成生物；miR-NC、miR-335-5p mimics、si-NC、si-TTTY15购自上海吉玛；pcDNA购自上海联迈生物；CCK-8试剂与凋亡试剂盒购自北京索莱宝；兔抗人Bcl-2、Bax单克隆抗体与二抗购自美国Santa Cruz。

    1.2 方法

    1.2.1 原代分离培养人骨关节炎软骨细胞[7]:选取2019年1月至2020年2月于我院接受人工膝关节置换的骨关节炎患者36例，其中男20例，女16例；年龄58～67岁 ......