杜静 贾冬雪 王书华

    全球疾病负担统计表明，我国脑卒中发病率高达39.9%，全球排名第一[1]。急性缺血性脑卒中目前最有效治疗方法之一为血管介入再通，而部分大血管开通后再灌注导致神经功能进一步恶化[2]，因此探索寻找保护缺血再灌注脑组织损伤的相关药物成为目前临床科研工作者一个研究热点。荭草苷是中药金莲花中的主要有效活性成分之一，课题组已成功从金莲花中提取出荭草苷，经证实其纯度达98.8%[3]，兔体内药代动力学研究表明荭草苷在肾、肝、脑等组织中均有分布，分布与消除较快，不易产生蓄积中毒[4]。团队既往研究表明荭草苷调控JNK/ERK通路抑制自噬过度激活对脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护[5]，而PI3K/Akt 信号通路是脑缺血再灌注损伤及自噬调控的重要通路，本实验进一步探讨荭草苷是否通过激活PI3K/Akt信号通路抑制线粒体自噬过度激活从而保护缺血再灌注大鼠脑组织，为荭草苷用于临床研究提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物：SPF级健康雄性SD大鼠，购自北京斯贝福生物科技有限公司，体重250～280 g，许可证号SCXK (京) 2019-0010，购进实验室后于温度(24±2)℃，湿度(50±2)%的条件下按照自然节律饲养，正常饮食标准适应性喂养1周后，选取体重和状态合格的大鼠进行后续实验。

    1.1.2 药品与试剂：荭草苷(自制，纯度98.8%)；LY294002(70920)，购自Cayman公司；自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)抗体(PM036)，日本MBL公司生产；Bcl-2/E1B-19 K相互作用蛋白3(BNIP3)抗体(A19593)，磷酸化Akt抗体(AP0140)，Akt抗体(A11016)，均购自ABclonal公司。

    1.1.3 仪器：电泳仪，美国Bio-Rad 公司；FM0530多色荧光和化学发光成像系统，ProteinSimple公司；Sigma 3K30型超速冷冻离心机 ......