余敏 崔跃 黎鹏飞 谢丹 陈芬

    心肌组织在短时间内供血或供养不足容易引起心血管疾病的发生，如中风、急性心肌梗死和缺血性心脏病等[1,2]。心肌缺血再灌注损伤可以促进心肌细胞凋亡、炎性反应和氧化应激损伤[3,4]，这也是急性心肌梗死患者病死率较高的原因[5]。miRNA在心血管疾病中异常表达，可以参与细胞的增殖、凋亡、氧化应激等生物学过程，进而参与心血管疾病的发生发展[6,7]。研究发现，抑制NPHP3-AS1通过调控下调miR305p减缓缺氧复氧诱导的心肌细胞细胞凋亡，促进心肌细胞的增殖[8]。组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)在缺氧/复氧诱导的神经细胞中表达水平升高，抑制HDAC9表达可以减缓缺氧复氧诱导引起的神经细胞凋亡和炎性损伤[9]。通过生物信息学网预测miR-30a-5p和HDAC9可能存在结合互补位点，但笔者发现miR-30a-5p是否调控HDAC9对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤尚不明确，本研究通过建立缺氧复氧心肌细胞H9c2模型，探讨miR-30a-5p通过调控HDAC9对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 大鼠心肌细胞H9c2购自中国科学院上海细胞库；10%胎牛血清、DMEM培养基购自美国Gibco公司；LipofectamineTM2000转染试剂盒、Trizol试剂盒购自美国Invitrogen公司；miR-NC、miR-30a-5p、si-NC、si-HDAC9、pcDNA和HDAC9序列和引物均购自上海吉玛制药公司；反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司；凋亡试剂盒、BCA试剂盒、ECL试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京索莱宝公司；HDAC9抗体、Bax抗体、Bcl-2抗体和GAPDH抗体购自美国Abcam公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒购自南京建成生物研究所。

    1.2 细胞培养与分组 心肌细胞H9c2复苏后，在含有10%胎牛血清的DMEM培养基内，置于培养箱内温度为37℃、饱和湿度为5% CO2条件下常规培养细胞传代 ......