唐亮 阴敏 张海 肖燕 马莹莹

    宫颈癌是女性生殖系统发病率较高的恶性肿瘤，严重威胁女性生命健康，尽管随着手术、放化疗及靶向治疗等综合治疗的进步，宫颈癌诊疗有所改善，但对于晚期宫颈癌预后仍然很差[1]。宫颈癌发病机制复杂，涉及抑癌基因失活、癌基因激活等，因此，寻找影响宫颈癌发生发展机制有重要意义。越来越多研究表明，微小RNA(microRNA，miRNA)与宫颈癌发生发展密切相关[2]。miRNA是一类内源基因编码的非编码RNA，长度约18-25nt，不翻译蛋白，可通过与靶基因mRNA的3’UTR结合，抑制靶基因翻译，从而在转录及转录后水平影响多种细胞功能[3]。在肿瘤中，miRNA可发挥癌基因或抑癌基因样作用，与肿瘤发生发展及转移等密切相关[4]。miR-411定位于染色体14q32，目前在肺癌、肾癌等肿瘤中有研究[5,6]，miR-411在宫颈癌中研究较少。有研究显示，miR-411可通过靶向STAT3抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭能力[7]，但miR-411对宫颈癌细胞凋亡及机制研究尚未明确。因此，本研究旨在miR-411对宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，并进一步研究其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 DMEM培养基、胰酶、胎牛血清、Opti-MEM培养基均购自美国Gibco；Trizol、LipofectamineTM2000试剂盒购自美国Invitrogen；miR-411 mimics及miR-NC、miR-411 inhibitor及anti-miR-NC、PIK3R3 siRNA及阴性对照siRNA、PIK3R3过表达载体及空载体均购自苏州吉玛生物制剂有限公司；MTT及DMSO均购自美国Sigma；Transwell小室、Matrigel胶、流式细胞仪均购自美国BD；Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒购自南京凯基生物；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒、ECL化学发光检测试剂盒均购自中国碧云天；PIK3R3、PI3K、p-AKT、PCNA、 E-cadherin和cleaved caspase3均购自美国Abcam；酶标仪、RT-PCR仪均购自美国Thermo公司。

    1.2 细胞及培养 宫颈癌Caski、SiHa和C-33A细胞及正常宫颈上皮永生化细胞End1/E6E7均购自美国ATCC。所有细胞使用含10% FBS的DMEM完全培养基培养，培养条件为5%体积分数CO2、37℃培养箱。观察到细胞覆盖瓶底80%～90%面积时 ......