柳越 王岩 高艳超 魏冰

    糖尿病肾病(DN)是主要的糖尿病微血管疾病之一，可影响糖尿病患者的长期生存率，更是终末期肾脏疾病的主要原因[1]。肾小管细胞损伤是DN的主要特征之一，研究认为高血糖通过多种机制促进活性氧产生，加重氧化应激反应，诱导肾小管上皮细胞凋亡增加，从而导致肾小管损伤[2]。因此，寻找有效抑制肾小管上皮细胞损伤的策略迫在眉睫。环状RNA(circRNA)是一类具有共价闭合环的非编码RNA，其通过与特定的微小RNA(miRNA)结合，减轻miRNA对靶mRNA的抑制作用，参与急性肾损伤、肾细胞癌、DN等多种肾脏疾病的进展[3-5]。研究报道circ_0041795在高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞中表达上调，沉默circ_0041795可抑制高糖诱导的炎性反应和细胞凋亡，促进细胞增殖，是治疗糖尿病视网膜病变的潜在靶点[6]。然而circ_0041795在DN进展中的作用并不清楚。靶基因预测显示miR-361-3p是circ_0041795的潜在靶点。有研究报道在高糖诱导的人脐静脉细胞损伤中miR-361-3p表达降低，过表达miR-361-3p可抑制高糖诱导的血管内皮损伤，是糖尿病内皮损伤治疗靶点[7]。本研究探讨circ_0041795对高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的影响，并通过miR-361-3p分析其可能的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2购于中国科学院上海细胞库；DMEM培养液、胎牛血清、青链霉素双抗购于武汉普诺赛生命科技公司；cDNA第一链合成试剂盒、miRNA荧光定量检测试剂盒购于北京天根生化科技公司；Power SYBR green master mix购于美国ABI公司；miRNA反转录试剂盒、细胞计数试剂盒(CCK-8)、双荧光素酶活性测定试剂盒购于北京百奥莱博科技公司；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin-V-FITC)/碘化丙啶(PI)凋亡检测试剂盒购于上海凯基生物公司；兔源Cleaved-caspase3抗体、兔源磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体、羊抗兔IgG二抗购自美国CST公司；超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(MDA)含量检测试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒购于北京索莱宝生物科技公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养、转染和分组:①HK-2细胞在DMEM培养液中培养，该培养基添加10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素 ......