孙静 张峰

    目前，肺癌在我国占城市人口恶性肿瘤死亡原因第一位。肺癌是临床最为常见的呼吸系统恶性肿瘤，具有高发病率、高死亡的特点[1]。肺癌主要特点为早期转移、生长迅速、高度侵袭性。但Ⅰ期肺癌术后10年生存率可高达90%左右。肺癌包括很多种类，其中最为常见的是非小细胞肺癌，大约占所有肺癌患者的80%左右，其早期症状为发热、咳嗽、胸疼等[2,3]。临床较为常用的治疗非小细胞肺癌的手段包括放疗、化疗、外科手术等，但临床疗效均不十分理想。TPX2蛋白在癌组织中呈现异常高表达，与癌组织的发展、转移具有密切联系[4-6]。本文研究中调控TPX2蛋白表达，旨在探究TPX2对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的调控能力及相关作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人非小细胞肺癌细胞株，购于上海中国科学院细胞库。主要试剂：兔抗大鼠Bak抗体(Invitrogen公司)；大鼠抗小鼠Bcl-2抗体(Dako公司)；兔抗小鼠caspase7抗体(Selleck公司)；抗体TPX2(biolegend公司产品)；BCA蛋白定量试剂盒、苏木素(广州市洁利生物有限公司)；MTT试剂盒(天根生化科技有限公司)；DAB显色试剂、磷酸盐缓冲液、胎牛血清、DMSO(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及分组:将非小细胞肺癌细胞株在37℃进行培养，在5%二氧化碳CO2饱和湿度细胞培养箱中，细胞培养液为10%胎牛血清。当细胞融入85%左右时进行传代。

    1.2.2 TPX2相对表达量检测:免疫组化采用SP法。TPX2上调序列：5’-ACCTTGCCCTACTAAGATT- 3’；TPX2下调序列：5’-AATGTGGCACAGGTTGAGC-3’ ......