陆明佳 王成凤 景燕 仲婷 李红燕

    缺血性中风是由大脑血流供应减少导致氧气和营养供应不足，引起血脑屏障(blood brain barrier,BBB)破坏，从而导致脑组织坏死的一类疾病，具有高发病率、高致残率和高死亡率，且预后较差，给家庭和社会带来沉重负担[1]。尽管在医学和血管内再通方面取得了进展，但缺血性中风的治疗选择仍然非常有限[2]。因此，迫切需要深入了解其发病机制，寻找新颖有效的治疗方法。已知许多机制与缺血性中风的发病机制有关。而由缺血/再灌注损伤引起的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)死亡是BBB破坏的初始阶段，可导致缺血性中风患者的不良预后[3]。miRNA已被证明在许多中枢神经系统疾病(如中风和脑外伤)中起作用[4,5]。miR-181a是miR-181家族中的一个成员，神经系统中存在表达，与海突触可塑性[6]、血管生成[7]、肿瘤转移[8]等有密切关系。近年来研究发现miR-181a在脑缺血组织中过表达，可以促进脑组织细胞凋亡和炎症的发生，加重神经损伤[9,10]。Qi等[11]发现在缺血缺氧诱导的心肌细胞损伤中，下调miR-181a的表达，可上调沉默信息调节因子1(silence information regulator 1,SIRT1)的表达，促进细胞活力，抑制细胞凋亡，并增加SOD水平。但是，在缺氧诱导的BMEC中，miR-181a的作用仍然未知。SIRT1在抑制细胞氧化应激反应、炎症和细胞凋亡中起关键作用，并且是miR-181a的靶基因[12,13]。因此，本研究以缺氧诱导的大鼠脑微血管内皮细胞(rBMECs)为对象，探究miR-181a对rBMECs增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 大鼠脑微血管内皮细胞(rBMECs)由上海晅科生物科技有限公司从大鼠脑中分离、培养并提供；胎牛血清、DMEM培养基、IMEM(无酚红)培养基、胰蛋白酶均购自美国Gbico公司；异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)购自美国Sigma-Aldrich；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；miR-181a inhibitor和miR-181a inhibitor阴性对照(NC inhibitor)、si-SIRT1和si-NC以及PCR引物序列由上海GenePharma公司设计合成；MTT试剂盒(C0009S)、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(C1062L)、RIPA裂解液(P0013B)、BCA试剂盒(P0010)均购自碧云天生物科技公司；2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)活性氧(ROS)检测试剂盒(CA1410-500)购自北京索莱宝科技有限公司；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)(WST-1法)(A001-3-2)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)(TBA法)(A003-1-2)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)测定试剂盒(微板法)(A006-2-1)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；Transwell小室(美国Corning公司 ......