温军业 张曼 范晓燕 陈旭光

    T淋巴细胞(T lymphocyte)亚群的功能，在恶性肿瘤、血液系统疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病、免疫缺陷病中发挥着积极的重要作用[1]。在多种恶性肿瘤(如乳腺恶性肿瘤、胃恶性肿瘤、肝恶性肿瘤、食管恶性肿瘤、肠道恶性肿瘤)患者的外周血或肿瘤组织中，CD4+T 细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值与患者的肿瘤分化程度、生存及预后密切相关[2,3]。因此，研究T淋巴细胞亚群的数量、分类及功能对于了解患者是否患有恶性肿瘤、免疫疾病、功能缺陷、感染性疾病及血液系统疾病等具有重要的意义。另外，其数值及变化规律对临床诊疗、病情监测和预后具有较好的临床指导价值。然而，动态监测荷瘤小鼠不同时期T细胞的变化过程，特别是初始T细胞的变化及作用机制，这方面的研究相对较少。本研究通过使用流式细胞技术，对荷瘤小鼠不同时期脾脏T细胞亚群水平进行动态监测，其数值的变化规律，可以有效的对荷瘤小鼠进行病情监测、判断其免疫状态及预后。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组 实验小鼠均为C57BL/6小鼠，6～8周龄，体重18～20 g，为雌性健康小鼠，购自河北省实验动物中心(许可证编号：SCXK冀2013-0051)，饲养于河北省实验动物中心(SPF级动物实验室，动物饲料及垫料均经放射线照射灭菌。实验室许可证号：SYXK(冀)2013-1-003)。饲养条件为：温度24℃～26℃，高效过滤器每5分钟换气1次，湿度40%～60%，每日保持12 h光照、12 h黑暗，交替进行。选取120只健康小鼠，挑选6只正常小鼠，为无瘤组，测其无瘤状态(Normal)的各项T淋巴细胞数值；其余小鼠随机分成2组，每组57只，A组为荷瘤组，B组为对照组。所有分组小鼠背部毛发都用备皮刀去除，去毛面积约为4 cm2，75%乙醇消毒小鼠背部颈后区域皮肤。

    1.2 药品与试剂 黑色素瘤B16细胞由中国医学科学院上海细胞库提供，活细胞数至少占总细胞数的96%，培养于保湿箱中(37.0℃，5% CO2)，培养液中培养(含10%灭活胎牛血清、100 U/ml 青霉素和100 μg/ml 链霉素的RPMI-1640) ......