刘园园 张培培 陈忠美

    缺血性中风发生时，部分脑部供血减少，导致葡萄糖和氧气供应不足，最终导致脑损伤。重组组织型纤溶酶原激活剂是目前惟一确立的脑卒中治疗药物，但由于时间窗限制具有较大的局限性[1]。脑损伤相关神经功能障碍影响患者的语言、认知和运动功能，严重降低患者生活质量。环状RNA(circRNA)是一类通过特殊的选择性切割机制产生的非编码RNA。circRNA可与特定的微小RNA(miRNA)结合，阻止miRNA翻译，并影响细胞增殖、凋亡、自噬等生物学过程，进而在心血管疾病、神经系统疾病、癌症的病理过程中发挥作用[2-4]。研究报道急性心肌梗死大鼠心肌组织和缺氧复氧诱导的心肌细胞中circRNA SAMD4A(circSAMD4A)抑制水平上调，circSAMD4A低表达可降低缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和炎性反应[5]。靶基因数据库预测到miR-410-3p是circSAMD4A的潜在靶点。研究发现，糖氧剥夺的原发皮层神经元中miR-410-3p水平显著下调，过表达miR-410-3p可增强神经元存活，抑制神经元凋亡，增加轴突长度，并显著恢复缺氧缺血性脑损伤大鼠的运动和认知功能[6]。本研究利用PC-12细胞建立体外缺氧缺糖细胞损伤模型模拟缺血性脑损伤过程[7]，研究circSAMD4A靶向miR-410-3p对缺氧缺糖神经细胞凋亡和氧化应激的影响，旨在为缺血性脑损伤治疗开辟新的途径。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 大鼠PC12细胞购自中国典型培养物保藏中心；EBSS无糖培养基、高糖DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；circSAMD4A的小干扰RNA(si-circSAMD4A)、miR-410-3p模拟物(mimics)、miR-410-3p抑制物(anti-miR-410-3p)以及各自阴性对照(si-NC、miR-NC、anti-miR-NC)、荧光素酶报告质粒购自上海生工生物工程公司；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；反转录试剂盒购自北京Takara生物公司；SYBR green master mix试剂盒购自南京诺唯赞生物科技公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂盒购自武汉金开瑞生物公司；兔源Cleaved-caspase3抗体、兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体购自美国CST公司；TRIzol试剂、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒以及丙二醛(MDA)检测试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒、RIPA裂解液购自北京索莱宝生物公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于北京全式金生物公司 ......