韦玲 杨凯 刘焕 程栋

    胃癌早期无明显症状，发病隐匿，多数胃癌患者确诊时已处于晚期[1]。胃癌的发生发展是一个包含癌基因激活和抑癌基因失活的多基因、多阶段的复杂过程，如何激活抑癌基因或抑制癌基因已成为抗肿瘤基因治疗研究特点。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类长度>200 nt的RNA分子，可通过特异性结合miRNA，抑制miRNA功能，间接调控蛋白编码基因，从而影响多种肿瘤细胞生长[2]。肌联蛋白反义RNA1(titin antisense RNA1，TTN-AS1)是一条发挥促癌作用的lncRNA，在肺癌、甲状腺癌等多种肿瘤中呈现高表达，可促进肿瘤进展[3,4]。有研究表明，普鲁卡因可抑制胃癌细胞增殖，促进细胞凋亡，但机制尚未明确[5]。有研究显示，普鲁卡因可通过上调miR-133b抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力，促进细胞凋亡[6]。miR-133b是miRNA家族成员之一，有研究表明，胃癌组织及细胞miR-133b低表达，过表达miR-133b可抑制胃癌细胞生长[7]。lncRNA TTN-AS1可靶向调控miR-133b影响食管癌进展和转移[8]。鉴于此，本研究旨在普鲁卡因调节lncRNA TTN-AS1对胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，为胃癌治疗提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 人胃癌SGC-7901细胞购自美国ATCC公司。RPMI 1640培养基、胰蛋白酶、胎牛血清、Opti-MEM培养基均购自美国Gibco公司；Trizol试剂盒、Lipofectamine 2000试剂盒均购自美国Invitrogen公司；MTT、DMSO均购自美国Sigma公司；Transwell小室购自美国Coming公司；Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡试剂盒、流式细胞仪均购自美国BD公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；荧光定量PCR仪购自美国ABI公司；酶标仪购自美国Bio-Rad公司。

    1.2 细胞培养 SGC-7901细胞常规复苏后，使用含10% FBS的RPMI 1640培养基培养，培养环境为5%体积分数CO2、37℃、饱和湿度孵箱。为单层贴壁生长，2～3 d换液1次，细胞达80%～90%汇合度时进行传代。取对数生长期的细胞用于实验。

    1.3 细胞转染 转染前1 d，取对数生长期的SGC-7901细胞，制备成细胞悬液，细胞计数后以1×106个/孔接种于6孔板，放置于5%体积分数CO2、37℃孵箱中培养 ......