施葵 张浩

    糖尿病是一种以血糖浓度升高为主要特征的代谢紊乱综合征，治疗不当会引起一系列糖尿病慢性并发症，危害机体心脏、大脑、肾脏等多个器官[1,2]。糖尿病脑病是公认的一种糖尿病慢性并发症，即由糖尿病代谢紊乱引起的中枢神经损伤[3]。糖尿病脑病主要导致语言、认知和运动功能障碍，临床表现为短期记忆缺陷、理解能力下降、行动迟缓等[4,5]。目前有研究报道糖尿病脑病与海马神经元凋亡具有密切关系[6]，因此寻找一种有效抑制海马神经元凋亡的药物对于糖尿病脑病的深入研究具有重要意义。右美托咪定是一种α2-肾上腺素受体激动剂，具有镇痛、镇静、抑制交感神经活性等作用[7]及有神经保护作用[8]。本文拟对右美托咪定在高糖诱导的神经元损伤中是否具有保护作用及机制进行研究，以期为临床治疗糖尿病脑病提供实验研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与主要试剂仪器 SPF级SD大鼠乳鼠10只购自北京维通利华实验动物技术有限公司，体重5～10 g，雌雄各半，许可证号：SCXK(京)2019-0009；控制SPF屏障内温度20℃～25℃，湿度50%～70%。本实验室对SD大鼠的处理符合实验动物福利及伦理规范。DMEM培养液(31600034)、胎牛血清(FBS)(16000-044)、胰蛋白酶(25200-056)等购自Gibco公司；CCK-8试剂盒(4020ES60)购自上海翊圣生物科技有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒(PT0001)购自北京雷根生物技术有限公司；TUNEL检测试剂盒(C1088)、Hoechst 染色液(C1018)购自碧云天生物技术有限公司；总蛋白提取试剂盒(78510)购自Thermo公司；GAPDH单抗(ab181602)、NeuN抗体(ab104224)、SYP抗体(ab184176)、cleaved cas-3抗体(ab13847)、Bax抗体(ab32503)、Bcl-2抗体(ab182858)、p-Akt蛋白抗体(ab38449)、Akt蛋白抗体(ab18785)、p-STAT3蛋白抗体(ab76351)、STAT3蛋白抗体(ab119352)等兔源多抗以及FITC标记的羊抗兔荧光二抗(ab6717)和HRP标记的羊抗兔二抗(ab6721)均购自Abcam。倒置荧光显微镜(Olympus IX70)；台式高速冷冻离心机(Eppendorf centrifuge,5415R)；PCR仪(Bio-Rad,S1000)；超低温冰箱(HISENSE)；蛋白凝胶成像仪(Thermo)；细胞恒温CO2培养箱(SANYO)；其他常规仪器均由本实验室提供 ......