刘兰宁 唐焕珍 李晓媛

    牙髓干细胞(dental pulp stem cells，DPSCs)是具有多能分化和自我更新能力的间充质干细胞，在组织修复和再生中发挥重要作用，已广泛应用于免疫疾病、口腔疾病、脊髓损伤、心肌梗死等疾病的治疗[1]。DPSCs在正常或病理条件下均可分泌直径为30～100 nm的微小囊泡，即DPSCs来源外泌体，在组织缺损修复过程中，DPSCs首先迁移至受损的组织区域，然后释放外泌体参与细胞间旁分泌的相互作用，通过诱发内源性修复过程来发挥治疗作用[2,3]。作为组织损伤的新型疗法，DPSCs外泌体疗法相较于传统干细胞治疗，不需要直接使用细胞，从而避免细胞移植相关的限制和风险[4]。miRNA是长度约为22～26个核苷酸的非编码RNA，可调节细胞增殖、代谢、凋亡和器官发育等多种病理生理过程[5]。研究表明，miRNA可调节巨噬细胞极化以及随后的炎性反应[6]；miR-124修饰的骨髓间充质干细胞外泌体负调控Ern1，从而促进巨噬细胞M2型极化并减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤[7]。而miR-124修饰的大鼠牙髓干细胞(rat dental pulp stem cells，rDPSCs)来源外泌体对巨噬细胞极化的影响尚未见报道，因此本研究通过提取miR-124修饰的rDPSCs来源外泌体并作用于皮肤缺损大鼠，观察其对巨噬细胞极化的影响以及治疗效果，以期为组织的再生调控提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 8周龄，体重为180～200 g，雄性SD大鼠购自广州赛业百沐生物科技有限公司，许可证号为：SCXK(粤)2020-0055。本研究得到了本院动物实验伦理委员会的批准，所有动物实验遵循3R原则。

    1.2 主要试剂与仪器 miR-124模拟物(miR-124 mimics)及其阴性对照(miR-NC)均购自广州基迪奥生物科技有限公司；Trizol试剂、ELISA检测试剂盒、BCA试剂盒均购自赛默飞世尔科技中国有限公司；α-MEM培养基、胎牛血清(FBS)均购自Sigma-Aldrich公司；TaqMan MicroRNA逆转录试剂盒、TransStart?Green qPCR SuperMix、ECL化学发光试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司；CD63、CD81、TNF-α、TNF-1β、IL-6、IL-4、IL-10、IL-13、GAPDH兔多克隆抗体(anti-CD63、anti-CD81、anti-TNF-α、anti-TNF-1β、anti-IL-6、anti-IL-4、anti-IL-10、anti-IL-13、anti-GAPDH)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG二抗均购自美国Abcam公司；CO2培养箱购自德国SIGMA公司；流式细胞仪购自美国BD公司 ......