杨学军 全信保 王强

    胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤，其发病率呈增长趋势，严重威胁人类生命健康[1]。由于胃癌发病隐匿，早期缺乏典型的临床特征，多数患者确诊时已处于中晚期[2]。目前，胃癌的治疗缺乏有效方法，寻找并研发用于治疗胃癌的药物尤为重要。红树莓俗称覆盆子、托盘等，其营养物质丰富，被誉为“黄金水果”。红树莓富含原花青素、酚酸类、黄酮类和三萜等多种活性物质，具有抗动脉粥样硬化、降血脂、抗氧化等活性[3-5]。研究显示，红树莓提取物可降低肝癌SMMC-7721细胞的增殖能力，其作用机制与AKT通路调控的cyclinA-CDK2介导的S期阻滞有关[6]。但目前，红树莓提取物能否影响胃癌细胞的恶性表型还未知。微小RNA(miRNA)是一类小分子非编码RNA，其参与调控肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移等恶性表型，可作为肿瘤治疗的分子靶点[7]。有报道称，miR-194-5p在胃癌组织和细胞系中表达下调，通过上调其表达可有效削弱胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，miR-194-5p有可能成为胃癌治疗的分子靶点[8]。本研究以胃癌细胞AGS为研究对象，主要探讨了红树莓提取物对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其能否通过调控miR-194-5p发挥作用，以期为其用于胃癌的治疗提供一定的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 AGS细胞系，中国科学院上海细胞库；胎牛血清(FBS)，杭州四季青；RPMI 1640培养基、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒，北京索莱宝；LipofectamineTM 2000试剂盒，美国Invitrogen公司；miR-194-5p抑制剂(anti-miR-194-5p)、抑制剂阴性对照序列(anti-miR-NC)及PCR引物，上海吉玛制药技术；兔抗人基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)抗体，美国Santa Cruz公司；RNA抽提试剂盒、逆转录试剂盒和PCR试剂盒，大连宝生物。

    1.2 方法

    1.2.1 红树莓提取物制备:红梅提取物的制备参照文献方法[9]：准确称取100 g红树莓样品 ......