王丹 成刚 廖英

    缺血性脑卒中是由于脑部供血不足、供血动脉狭窄或闭塞引起的脑部组织坏死，具有较高的致残率、发病率和死亡率，严重威胁人类的生命健康安全[1,2]。星形胶质细胞广泛分布在大脑中，通过神经递质转运等方式对神经损伤具有保护作用，脑部缺血引起的星形胶质细胞损伤能加剧神经细胞的死亡[3]。所以，如何有效减缓星形胶质细胞损伤是预防缺血性脑卒中的重要研究方向。随着研究的不断深入，长链非编码RNA(lncRNA)在缺血性脑卒中包括神经系统内疾病是近年医学研究的热点，如MALAT1、MEG3、H19、CaMK2D等已被证实[4]。有研究结果显示，SNHG14在OGD/R诱导的神经细胞内表达上调，抑制SNHG14能降低OGD/R诱导的神经细胞的炎性反应[5]，但是OGD/R诱导的星形胶质细胞研究相对较少。miRNA与神经系统疾病密切相关[6]，有研究发现，miR-372-3p在OGD诱导星形胶质细胞内表达下调，miR-372-3p靶向负调控TLR4减缓OGD诱导星形胶质细胞凋亡和氧化损伤，并促进细胞的增殖[7]。在线生物信息学网站预测显示SNHG14和miR-372-3p存在互补的核苷酸序列，本研究通过OGD/R损伤细胞模型，探讨SNHG14通过调控miR-372-3p对OGD/R诱导的星形胶质细胞增殖、凋亡和炎性反应的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与主要试剂 刚出生24 h的5只SD级大鼠购自上海斯莱克实验动物有公司，许可证号SCXY(沪)2017-0005。大鼠饲养在本实验内，室温20～24℃，相对湿度50%～60%，自由进食和饮水，待适应7 d后进行实验。DMEM/F12无糖培养基、胎牛血清、DMEM/F12高糖培养基购自美国Gibco公司；si-NC、si-SNHG14、miR-NC、miR-372-3p、anti-miR-NC、anti-miR-372-3p和引物购自赛默飞世尔公司；Lipofectamine 2000试剂盒、TRIzol试剂盒购自美国Invitrogen公司；PrimeScript RT试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本Takara公司；MTT试剂盒购自上海晶抗生物；凋亡试剂盒购自江苏凯基生物；Bcl-2抗体、Bax抗体、GAPDH抗体购自美国CST公司；HRP标记的二抗购自武汉博士德生物；TNF-α试剂盒、IL-10试剂盒购自南京建成生物研究所；双荧光素酶试剂盒购自Promega公司 ......