王凯 李伟伟 王佳

    食管癌为临床常见消化道肿瘤，发病率呈现逐年升高趋势，其恶性程度高，死亡率高，食管癌的治疗手段主要为手术和放化疗，但患者预后不佳，5年生存率较低，因此，研究食管癌发生发展的机制对其临床治疗具有重要意义[1,2]。白头翁皂苷是从白头翁中提取的具有生物活性的天然产物，具有抗炎、抗肿瘤的作用，白头翁皂苷有多种有效单体成分，其中白头翁皂苷D(pulsatilla saponin D)具有抗多种肿瘤的作用[3]。王冰等[4]研究表明，白头翁皂苷D可通过调控Wnt信号通路而抑制宫颈癌细胞的增殖。腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase，AMPK)是细胞能量代谢的调节器，AMPK的激活可抑制人食管癌细胞的生长增殖，并可诱导细胞凋亡[5]。环氧合酶-2(cyclo-oxygenase-2，COX-2)作为一种诱导酶，在食管癌等多种肿瘤组织中表达水平升高，具有促癌的作用[6]。研究显示，吲哚类化合物GY3可激活AMPK并抑制COX-2的表达抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖，并诱导其凋亡[7]。因此，本研究观察白头翁皂苷D对EC9706细胞凋亡及AMPK/COX-2通路的影响，初步探讨白头翁皂苷D对食管癌的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 白头翁皂苷D(纯度≥98%)购自南京春秋生物工程有限公司，人食管癌细胞EC9706购自中国科学院上海细胞库，AMPK抑制剂Compound C购自德国Merck公司；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)与DMEM细胞培养基购于美国Gibco公司，胰蛋白酶、四甲基偶氮唑盐(MTT)试剂盒购自Sigma公司；异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(Annexin Ⅴ-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒、ECL化学发光试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；兔抗人Bax、Bcl-2、p53、COX-2单克隆抗体及羊抗兔IgG单克隆抗体购自美国Abcam公司；兔抗人p-AMPKα、p-ACC多克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；ELx800型酶标仪购自美国Bio-Tek公司 ......