周宁 于文燕

    胃癌(gastric cancer)是一种常见的恶性消化系统肿瘤，病死率高居世界癌症第二位[1]，2018年估计有78.3万人死于胃癌，50%的患者来自中国，欧洲国家胃癌5年生存率为10%～30%[2]。研究胃癌进展的潜在机制，为疾病诊治提供有效分子靶点，已成为胃癌基础临床研究的重点。miRNA(micro RNA)在胃癌组织和体液中表达异常，对胃癌诊断和预后具有重要应用前景[3]。另有研究表明，miR-299-3p在舌鳞状细胞癌[4]、肝癌[5]中都发挥抑癌作用，miR-299-3p在胃癌组织中低表达，可能参与胃癌的发生发展[6]。乙醛脱氢酶3A1(aldehyde dehydrogenase 3A1，ALDH3A1)在胃癌细胞中高表达，高表达ALDH3A1的胃癌患者生存期显著缩短[7,8]。下调ALDH3A1会抑制NF-κB的转录，进而抑制肺癌细胞的增殖[9]。miR-299-3p和ALDH3A1在胃癌中是否存在关系也有待研究。本研究旨在探寻miR-299-3p对胃癌凋亡的影响，并分析其作用机制是否与调控ALDH3A1有关。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、MKN-45和正常胃上皮细胞GES-1购自ATCC；胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(10099141)和RPMI-1640培养基(C22400500BT)购自美国Gibco公司，牛血清白蛋白(Bovine Serun Albumin,BSA)(A3912)、四氮唑蓝(MTT)(M2128)、二甲基亚砜(DMSO)(D2650)和胰蛋白酶Trypsin(T7409)购自美国Sigma-Aldrich公司；引物、miR-299-3p模拟物(miR-299-3p)、抑制剂(anti-miR-299-3p)、ALDH3A1的过表达载体(pcDNA- ALDH3A1)、干扰物(si-ALDH3A1)、阴性对照(miR-con、anti-miR-con和si-con)、双荧光素酶载体、空载体pcDNA购自上海吉玛制药有限公司；双荧光素酶报告系统购自美国Promega公司；Bax抗体(ab32503)、Bcl2抗体(ab59348)、NF-κB抗体(ab28849)、ALDH3A1抗体(ab76976)和β-actin抗体(ab179467)购自英国Abcam公司；IκB-α抗体(9242s)、p-IκB-α抗体(2859s)抗体购于美国CST公司；RNA提取试剂TRIzol(10296010)、Lipofectamine 2000转染试剂(13778-075)、反转录试剂、real-time PCR 试剂盒购自美国Invitrogen公司；细胞凋亡检测试剂盒购自美国BD公司 ......